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目的探讨慢性乙型肝炎(CHB chronic hepatitis B)患者肝细胞凋亡与肝组织诱导性一氧化氮合酶(iNOS inducible nitric oxide synthase)表达,肝脏病理及血清转氨酶水平之间的相关关系。方法取74例CHB患者和10例正常对照,采用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝组织中的细胞凋亡情况,免疫组化法检测肝组织iNOS的表达,常规测定患者肝组织炎症分级和纤维化分期、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV-DNA水平。结果1.研究对象的一般情况患者组:74例CHB患者,平均年龄为(33.1±10.3)岁,其中男性41例,女性33例。ALT异常者44例,平均水平为(184.6±114.5)U/L;ALT正常者30例,平均水平(27.6±8.3)U/L。HBeAg阳性者50例,HBeAg阴性者24例。血清HBV DNA阳性者平均值(3.8±7.6)×10~6copy/ml,肝组织HBVDNA平均值(8.1±12.6)×10~7copy/ml。对照组:10例健康对照者,平均年龄为(30±1.83),其中男性8例,女性2例。未见ALT异常者。2.凋亡结果TUNEL染色阳性定位于细胞核,凋亡细胞阳性为细胞核呈棕褐色,较小的棕褐色圆形小体为凋亡小体,只有强阳性染色者才被认为是凋亡,凋亡小体并未被统计,因为这有可能过高估计凋亡细胞数。在正常对照肝组织中,未见到TUNEL阳性染色的肝细胞,而所有CHB患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性细胞。发生凋亡的肝细胞常位于炎症细胞浸润区域附近,但偶也可见于远离炎症细胞,且凋亡细胞不仅可见于汇管区,小叶内也可见其存在。一些凋亡细胞或小体显示核膜强阳性染色,而细胞核的其余部分染色较淡,可能是染色体边聚现象。镜下选凋亡细胞数较多的5个高倍镜视野(×400倍)每个视野计数200个细胞,凋亡指数(AI apoptosis index)=凋亡细胞数/肝细胞总数×100%。慢乙肝患者的平均AI为7.60±0.43。3.肝细胞凋亡和ALT的关系慢性乙肝炎患者ALT正常者平均凋亡指数为7.60±0.43,而ALT异常者平均凋亡指数为0.337±0.218,差异无显著的统计学意义(P＞0.05),AI与ALT之间并无明显线性相关(P＞0.05)。4.肝细胞凋亡与肝组织病理学改变的关系CHB患者肝细胞凋亡指数与肝组织炎症分级程度呈显著正相关,(r=0.404,P=0.015),随炎症程度的加重而增强,但在不同肝组织纤维化分期之间无显著性差异(P＞0.05)。5.肝组织中iNOS的表达7例正常肝组织均未见到iNOS阳性信号,74例CHB患者肝组织中iNOS阳性率71.6%,与正常肝组织相比表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01)。iNOS阳性信号在CHB患者肝组织内呈棕黄色或棕褐色,均质或颗粒状染色,弥漫或灶状分布,以肝细胞胞浆表达最为明显,亦有胞膜染色。枯否细胞、窦内皮细胞、血管内皮细胞中也可见iNOS表达。6.肝细胞凋亡和诱导性一氧化氮合酶之间的关系凋亡指数与诱导性一氧化氮合酶之间呈显著相关,(r=0.45,P=0.004),AI随一氧化氮合酶表达的升高而升高。结论慢性乙型肝炎患者体内NO水平可能是肝细胞凋亡的诱导因素之一,细胞凋亡参与了CHB的肝细胞损伤过程,但并不影响患者的生物化学指标。