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随着转基因技术的发展与转基因作物的大量种植,转基因作物可能对人体健康、生物多样性和环境安全等方面带来的负面影响也逐渐引起了各国的关注。为此,欧盟、日本等国家开始对转基因作物实行强制性的标识制度,对转基因检测技术的特异性和准确性提出了严格的要求,转基因检测技术也成为研究热点。我国于2002年3月20日起施行《农业转基因生物标识管理办法》,要求对5类转基因生物所涉及的17种转基因产品进行标识,其中也包括了转基因棉花、转基因油菜籽、转基因玉米和转基因大豆四种农作物。因此建立一套方便、快捷的转基因产品检测技术是贯彻标识制度的重要前提。本研究以4类转基因作物为检测对象,以本课题建立的多重PCR引物设计方法为基础,建立起一整套包括四种多重PCR检测体系,主要取得的成果如下:1、以大豆内源基因Lectin、外源抗除草剂基因EPSPS、CaMV35S启动子和NOS终止子为检测对象,分别设计了四对引物,通过研究较佳引物终浓度配比和退火温度,建立了大豆转基因成分四重PCR检测体系。结果表明,建立的四重PCR体系可用于同时检测内源基因和转基因成分,稳定性好。2、以玉米内源基因IVR、外源抗除草剂基因(PAT)、抗虫基因Cry1Ab、筛选基因NPTⅡ、CaMV35S启动子和NOS终止子为检测的目的片段,通过研究较佳引物终浓度配比和退火温度,建立了玉米转基因成分七重PCR检测体系。结果表明,建立的七重PCR体系用于同时检测内源基因和转基因成分是可行的,检测方法效率高、稳定性好。3、以油菜内源基因PEP、抗除草剂基因(BAR、PAT)、筛选基因NPTⅡ、常见启动子(CaMV35S, FMV35S)和终止子NOS为检测对象,通过研究较佳引物终浓度配比和退火温度,建立了菜籽粕转基因成分多重PCR检测体系。结果表明,本研究所建立的检测体系能有效检测出菜籽粕以及其它作物(大豆、玉米、大米、棉籽)中的转基因成分,检测过程简便、准确,值得推广应用。4、以棉花内源基因sad1、报告基因GUS、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、筛选基因NPTⅡ、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象,通过研究较佳引物终浓度配比和退火温度,建立了棉花转基因成分6重PCR检测体系。结果表明:采用本研究建立的棉籽基因组DNA提取方法,该6重PCR检测体系能够有效地从少至1颗棉籽的少量样品里检测出棉花中的转基因成分。5、本研究在多重PCR检测的过程中通过摸索建立起一套便捷、实用、效果优良的多重PCR引物设计体系,此多重PCR引物设计方法通过了先后多达45条的引物验证和数次引物调整的考验,克服了多重PCR引物设计上的困难,有较好的借鉴作用。本研究以上述四种作物转基因成分的多重PCR检测体系为基础,经多次重复验证研发出转基因作物多重PCR检测试剂盒,效果良好,适合推广并应用,可作为快速检测转基因植物及其产品中的转基因成分的可选方法。