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目的:1.研究气体全麻药物地氟醚对小鼠中枢及外周肾脏、肝脏组织时钟基因表达量的影响及其作用机制;2.研究静脉全麻药物丙泊酚对细胞时钟基因整体生物钟的影响;方法:1.用不同浓度(3%,4%,6%,7%,9%)的地氟醚麻醉C57BL/6J(C57)小鼠,通过翻正反射确定地氟醚的有效作用浓度。2.将C57小鼠分为空气对照组和地氟醚实验组,实验组在ZT2时用前述确定的地氟醚浓度(7%)处理,对照组同时通入空气,2小时后采用qPCR检测各组小鼠下丘脑、肾脏和肝脏组织时钟基因Per1、Per2、Dbp、Bmal1、Clock和Cry1表达量的变化。3.提取待鉴定基因型小鼠的DNA,进行PCR鉴定。反应产物加入琼脂糖凝胶电泳检测。4.将Per1-/-/Per2-/-小鼠分为空气对照组和地氟醚实验组,实验组在ZT2时用前述确定的地氟醚浓度(7%)处理,对照组同时通入空气,2小时后采用qPCR检测各组小鼠下丘脑、肾脏和肝脏组织时钟基因Dbp、Bmal1、Clock和Cry1表达量的变化。5.将U2OS细胞的DMEM培养基更换为XM培养基,根据丙泊酚终浓度梯度(1.5μM、6μM、12μM、50μM),各皿分别加入对应体积的丙泊酚,对照组加入等体积PBS溶液。放入Lumicycle光度测定仪记录细胞中时钟基因的长时生物钟。结果:1.3%地氟醚处理后无小鼠达到翻正反射消失;4%、6%、7%、9%地氟醚处理后达到翻正反射消失的小鼠比例分别为16.7%、50%、100%和100%,因此确定实验中使用地氟醚的作用浓度为7%。2.与对照组相比,7%地氟醚麻醉C57小鼠2小时后,下丘脑组织时钟基因Per2的表达量显著降低(P<0.05),其余五个时钟基因的表达量无显著性改变(P>0.05);肾脏组织中时钟基因Per1的表达量显著升高,时钟基因Bmal1、Dbp的表达量显著降低(P<0.05),另外三个时钟基因的表达量无显著性改变(P>0.05);肝脏组织时钟基因Per1的表达量显著升高(P<0.05),其余五个时钟基因的表达量无显著性改变(P>0.05)。3.所得条带在440bp处表示为Per1-/-小鼠,条带在320bp处表示为Per2-/-小鼠,在440bp和320bp处均有条带表示为Per1-/-/Per2-/-小鼠,在416bp处有条带表示为Per1+/+小鼠,在388bp处有条带表示为Per2+/+小鼠,在416bp和388bp处均有条带表示为Per1+/+/Per2+/+小鼠。将基因组在440bp和320bp处均有条带的小鼠视为Per1-/-/Per2-/-纯合子。4.与对照组相比,7%地氟醚麻醉Per1-/-/Per2-/-小鼠2小时后,下丘脑组织时钟基因Bmal1、Clock、Dbp的表达量显著降低(P<0.05);肝脏组织和肾脏组织时钟基因Cry1、Clock的表达量显著降低(P<0.05),Bmal1、Dbp的表达量无显著性改变(P>0.05)。5.相比于对照组,1.5μM丙泊酚导致细胞时钟基因Per2的振幅增加,但丙泊酚处理浓度增加后,时钟基因Per2的振幅降低,且降低程度具有浓度依赖性,而对照组和加药组U2OS细胞时钟基因Per2的节律周期均在22-23小时之间波动,无显著性改变(P>0.05)。结论:1.气体麻醉药地氟醚显著影响小鼠中枢及外周组织的生物钟,但不直接通过Per基因产生作用;2.静脉麻醉药物丙泊酚降低细胞中时钟基因Per2的振幅。