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目的:通过观察肠激宁方对肝郁脾虚证IBS-D患者的临床疗效,由症状量表评估患者症状改善情况及其总体效果,开发中医药在治疗IBS-D的临床优势。同时通过观察肠激宁方对肝郁脾虚证IBS-D模型大鼠水通道蛋白及其相关信号通路的影响,探讨其作用机制。方法:一、临床研究:选取2016年1月-2017年12月期间广东省第二中医院门诊或住院患者中符合肝郁脾虚证IBS-D患者96例,采用SPSS统计软件生成随机数字表,分为实验组和对照组,每组各48例,实验组予肠激宁方,对照组予痛泻宁颗粒,共治疗4周。治疗前、治疗后分别予临床症状量表评分,统计并分析症状改善情况及复发率等数据,探讨肠激宁方的临床效果。二、动物试验:将80只SPF级大鼠根据随机数字表,分为造模组(60只)及空白对照组(20只),其中模型组大鼠予以饥饱失常与番泻叶灌胃,联合游泳致疲劳试验,模拟肝郁脾虚证IBS-D大鼠模型,造模14d。造模成功后,将大鼠随机分为实验组(20只)、阳性对照组(20只)、模型组(20只),每组大鼠雌雄各半,其中实验组予肠激宁方溶液灌胃,阳性对照组予痛泻宁颗粒溶液灌胃,造模组及空白组予生理盐水灌胃,1次/d灌胃,灌胃14天。14d后,观察大鼠的一般情况(体重,皮毛光滑度等)及活动度,检测大鼠粪便含水量、稀便级数及结肠敏感度,统计并分析糖水偏好实验、大鼠活动度情况。采集大鼠幽门至回盲部的肠管,计算其炭末推进率。同时剪取距肛门5cm处的结肠,截取3cm组织,研磨成组织匀浆,检测大鼠结肠组织中大鼠蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷(c AMP)、水通道蛋白4(AQP4)的蛋白表达水平,并进行统计学分析,探讨肠激宁方的作用机制。结果:一、临床研究:临床症状积分减分程度:肠激宁组治疗后评分为6.75±3.32,痛泻宁组为8.58±4.02,肠激宁组积分改善程度显著优于痛泻宁组(P<0.05)。积分量表减分程度的有效率情况:肠激宁组有效率为93.75%,显著高于痛泻宁组的77.08%(P<0.05)。症状复发率情况:肠激宁组的症状复发率为4.17%,显著低于痛泻宁组的20.83%(P<0.05)。二、动物实验大鼠体质量的情况:模型组体质量增加为13.36±3.45g,肠激宁组为22.96±5.07g,痛泻宁组为18.44±5.78g,空白组为28.79±5.79g。肠激宁组、痛泻宁组、空白对照组体重增长较模型组较显著,均显著升高(P<0.05),其中肠激宁组体重增长高于痛泻宁组,且差异有显著意义(P<0.05)。IBS-D模型大鼠粪便含水量结果:模型组大鼠粪便含水量(单位:%)为44.32±2.99,肠激宁组为33.47±3.10,痛泻宁组为39.32±2.62,空白组为32.71±2.42。与模型组相比,空白组、肠激宁组、痛泻宁组的粪便含水量(P<0.05)均显著性降低。与痛泻宁组比较,肠激宁组的粪便含水量显著性降低(P<0.05)。IBS-D模型大鼠稀便率结果:模型组大鼠稀便率(单位:%)为65.22±9.38,肠激宁组为37.92±7.21,痛泻宁组为56.95±7.67,空白组为36.13±6.07。与模型组相比,空白组、肠激宁组、痛泻宁组稀便率(P<0.05)均显著性降低。与痛泻宁组比较,肠激宁组的稀便率显著性降低(P<0.05)。IBS-D模型大鼠糖水偏好率结果:模型组大鼠糖水偏好率(单位:%)为55.87±3.20,肠激宁组为70.56±2.24,痛泻宁组为61.95±2.95,空白组为73.95±2.45。空白组、痛泻宁组、肠激宁组糖水偏好水平,较模型组均显著性升高(P<0.050);与痛泻宁组糖水偏好水平比较,肠激宁组糖水偏好显著升高,且具有显著差异(P<0.050)。IBS-D模型大鼠旷场实验评价:模型组大鼠旷场实验水平得分为101.74±5.25,肠激宁组为115.41±8.50,痛泻宁组为107.67±7.89,空白组为124.78±5.77;模型组大鼠旷场实验垂直得分为12.92±3.06,肠激宁组为17.96±3.17,痛泻宁组为14.86±2.41,空白组为18.02±3.15;空白组、痛泻宁组、肠激宁组在垂直得分(P<0.050)、水平得分(P<0.050)均高于模型组旷场试验活动度水平,具有显著统计学差异。其中,肠激宁组水平得分、垂直得分较痛泻宁组均升高,具有显著性差异(P<0.050)。IBS-D模型大鼠结肠敏感度结果:模型组大鼠抬腹压力阈值(单位:mm Hg)为29.92±4.01,肠激宁组为36.16±3.82,痛泻宁组为33.06±5.02,空白组为40.87±4.86;空白组、肠激宁组、痛泻宁组阈值较模型组抬腹压力阈值升高,具有显著性差异(P<0.050),其中肠激宁组较痛泻宁组抬腹压力阈值升高且具有统计学意义(P<0.050)。模型组大鼠拱背压力阈值为32.54±3.04,肠激宁组为38.00±4.50,痛泻宁组为34.78±4.06,空白组为39.98±4.03;空白组、肠激宁组、痛泻宁组拱背压力阈值高于模型组,且差异具有显著性(P<0.050),其中肠激宁组较痛泻宁组拱背压力阈值高,差异具有显著性(P<0.050)。IBS-D模型大鼠炭末推进率结果:模型组大鼠炭末推进率(单位:%)为55.06±5.95,肠激宁组为49.28±7.41,痛泻宁组为54.30±5.81,空白组为49.79±6.68;空白组、肠激宁组、痛泻宁组推进率与模型组小肠推进率相比偏低,差异具有显著性(P<0.050),其中肠激宁组炭末推进率低于痛泻宁组,且具有统计学意义(P<0.050)。IBS-D模型大鼠PKA蛋白表达水平:模型组大鼠PKA蛋白表达含量(单位:ng/ml)为0.558±0.107,肠激宁组为0.743±0.077,痛泻宁组为0.654±0.078,空白组为0.828±0.073;与模型组PKA蛋白含量对比,空白组、肠激宁组、痛泻宁组含量均升高,且差异具有显著性(P<0.050),其中肠激宁组PKA含量高于痛泻宁组,且具有统计学意义(P<0.050)。IBS-D模型大鼠c AMP蛋白表达水平:模型组大鼠c AMP蛋白表达含量(单位:ng/ml)为0.319±0.086,肠激宁组为0.465±0.073,痛泻宁组为0.380±0.087,空白组为0.533±0.650;与模型组c AMP蛋白表达含量对比,空白组、肠激宁组、痛泻宁组含量显著性升高(P<0.050),其中肠激宁组PKA含量高于痛泻宁组且具有统计学意义(P<0.050)。IBS-D模型大鼠AQP4蛋白表达水平:模型组大鼠AQP4蛋白表达含量(单位:ng/ml)为0.352±0.079,肠激宁组为0.478±0.079,痛泻宁组为0.423±0.082,空白组为0.507±0.081;空白组、肠激宁组、痛泻宁组AQP4蛋白含量高于模型组AQP4蛋白含量,且差异具有显著性(P<0.050),其中肠激宁组AQP4含量高于痛泻宁组且具有统计学意义(P<0.050)。结论:临床实验结果显示:1.肠激宁方对于改善肝郁脾虚证IBS-D患者腹痛、腹泻等临床症状,有较好的疗效。2.此临床研究中患者未出现不良反应,表明肠激宁方具有较好的安全性。动物实验结果显示:1.肠激宁方可通过干预PKA/c AMP的信号通路,介导AQP4的膜囊泡穿梭机制,上调AQP4的表达,调节结肠对水的通透性,从而改善IBS-D的腹泻状况,达到治疗肝郁脾虚证IBS-D的效果。2.肠激宁方能有效改善IBS-D模型大鼠的激惹症状及稀便情况。综合论述,肠激宁方对于肝郁脾虚证IBS-D具有良好的临床效果,值得临床上广泛推广。