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目的:脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)具有高死亡率和高发病率的特点,除其所带来的原发性脑损伤外,脑出血后继发性脑损伤(secondary brain injury,SBI)多导致严重的神经功能缺损甚至造成死亡,目前已被医学界视为急需解决的重要公共卫生问题,引起了各界广泛的关注。木犀草素(luteolin)是一种具有抗氧化应激,调控自噬等多重药理作用的黄酮类化合物,在多种疾病模型中均有研究。但是,木犀草素与ICH的相关研究尚未见报道。既往研究表明p62(sequestosome 1,p62)/Kelch样环氧氯丙丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keapl)/核转录因子 E2 相关因子 2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)是一条调控自噬发挥抗氧化应激作用的重要通路。因此,我们研究了木犀草素对ICH后SBI的神经保护作用,及其抗氧化应激和调节自噬的潜在作用机制。方法:将Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为6组:假手术组、ICH组、ICH+vehicle组及三个ICH+木犀草素治疗组(木犀草素剂量分别为5、10和20 mg/kg)。通过向大鼠右侧基底节区注射100μl非肝素化的自体全血构建ICH活体大鼠模型。采用神经行为学评分评估神经功能障碍,干湿重法检测脑水肿水平,Morris水迷宫实验用来评估认知水平。造模后24小时取大鼠右侧基底节区脑组织作为标本,使用蛋白印迹(Western blot,WB)技术和免疫共沉淀技术(coimmunoprecipitation,CO-IP)检测p62/keaP1/Nrf2通路的蛋自表达和Nrf2的泛素化水平,并做统计学分析。同时培养原代大鼠皮层神经元,使用氧合血红蛋白白(oxyhemoglobin,OxyHb)构建ICH体外模型。使用不同浓度的木犀草素(5、10和20 μM)和OxyHb(10 μM)处理神经元24小时。WB技术用于检测p62/keap 1/Nrf2通路的蛋白表达,线粒体超氧化物(MitoSOX)染色评估线粒体超氧化物水平,同时JC-1染色用于检测线粒体损伤。结果:1.木犀草素能有效减轻大鼠脑出血后脑水肿,改善神经行为障碍和认知障碍。2.体内实验:木犀草素通过上调自噬作用,促进Nrf2核转位,激活p62/keap1/Nrf2通路。同时,木犀草素抑制了 Nrf2的泛素化,上调了 Nrf2下游抗氧化应激蛋白血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和醌氧化还原酶 1(NADPH:quinine oxidoreductase 1,NQO1)的表达水平。3.体外实验:木犀草素抑制了脑出血后神经元线粒体超氧化物的产生,减轻了神经元线粒体的损伤。且木犀草素对p62/keap1/Nrf2通路蛋白的激活作用可以被自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)逆转。结论:在大鼠实验性脑出血体内外的研究中,木犀草素通过上调自噬,抑制氧化应激,激活p62/keap1/Nrf2通路从而起到神经保护作用。因此,木犀草素可能是治疗脑出血后继发性脑损伤的潜在药物。