披碱草×野大麦F1代愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

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本文以披碱草×野大麦F1代幼穗为外植体,运用植物组织培养技术,以诱导愈伤组织并提高其诱导率为目的,设置不同的培养基并选取不同长度的幼穗,筛选出较为适宜的培养基,确定出较为合适的外植体长度。经过长期继代培养的愈伤组织,由于体内内源激素水平改变,其细胞活性低,生长速度明显减慢,通过改变培养基的激素浓度,使其恢复生长活性,实现利用激素对细胞生长的调控作用。在对细胞进行液体培养时,通过正交试验筛选出16种培养基,不同的激素对细胞生长的影响不同,确定出适合进行悬浮培养的液体培养基。观察悬浮细胞的生长过程,掌握其生长变化情况,确定出较为适宜的继代时间,了解细胞生长过程中的变化规律,更好地掌握悬浮细胞的生长情况。为了提高整个悬浮系的生长效率,对培养条件进行优化,确定出较为适宜的初始接种量、pH值、以及蔗糖含量。主要研究结果如下:(1)以披碱草×野大麦F1代幼穗为外植体诱导愈伤组织,以MS为基本培养基,添加3mg/L的2,4-D是较为适宜的诱导培养基,诱导率达到28.3%,愈伤组织质地良好,结构松散,为较好的胚性愈伤组织。(2)长度为2~3cm幼穗是较为合适的为外植体长度,诱导率达31.6%。(3)MS+2,4-D 3mg/L+KT 0.5mg/L+CH 300mg/L 与 MS+2,4-D4mg/L 均可改善经过长期继代生长质量较差的愈伤组织的生长情况,使其恢复正常的生长状态。(4)MS+2,4-D 1mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.2mg/L+NAA 1mg/L 是较为理想的液体培养基,在该培养液中生长的细胞,生长旺盛,分散性好且细胞呈现淡黄色,培养液透明。在经过49天的悬浮培养后,初步建立起一个稳定、高效生长状态良好的悬浮系。(5)通过对细胞的生长特性以及细胞活性的测定发现每七天继代一次较为合适,充足的营养物质可以及时的给细胞生长发育提供能量,同时也有利于细胞多次继代后细胞活性力的保持,建立稳定高效的细胞悬浮系。(6)对悬浮培养进行优化实验设计,pH值为5.8,蔗糖浓度为30g/L,初始接种量为1.5g,有利于细胞的悬浮培养,提高生长量。
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