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目前,有关肿瘤恶性转化和癌转移的大量相关研究都在利用近年来的新方法和新技术,例如基因芯片技术、差异展示技术(DD)、代表性差异分析技术(RDA)、消减杂交技术(SH或SSH)和蛋白质组学分析技术等等,但每一种技术都存在着本身的不足或弊端。本研究从基因功能特性(恶性转化和癌转移特征)作为切入点,利用人肺腺癌最易发生转移的特点,以生物学性状稳定的人非小细胞肺癌研究体系为实验材料,采用将细胞生物学表型研究和相关基因克隆相结合的技术路线和研究手段,把肺癌的恶性转化和转移,从分子水平的研究与细胞行为以及整体表型结合起来,达到有效筛选恶性转化和癌转移相关基因的目的。
本研究利用pcDNA3.1/V5-HisTOPO(R)TAExpressionvector构建人高转移肺癌细胞系Anip973、95DcDNA表达文库,转染NIH3T3细胞,根据转染细胞在软琼脂(softagar)中形成集落的表型不同,筛选到肿瘤相关基因TSG101(tumorsusceptibilitygene101)。进一步的研究表明在一些非小细胞肺癌细胞系中TSG101cDNA存在突变,且形式为不同位点的点突变而非其它肿瘤中常见的选择性剪接;并且在肺巨细胞癌中TSG101cDNA存在一多态性位点,为834位g/a,在四例肺巨细胞癌中表达率100%。RT-PCR检测表明在大多数的肺癌细胞系和肺癌组织中TSG101表达较正常组织为高。
为进一步探讨TSG101基因在肺癌细胞中的作用,本研究构建TSG101基因的真核正义表达载体诱导基因的过表达。体外培养稳定转染后的A549细胞,通过普通光镜和电子显微镜观察表明TSG101基因的过表达影响细胞形态,流式细胞仪分析它的过表达还能使细胞大量过渡到S期,促进细胞生长与增殖。