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目的:构建并鉴定微粒体前列腺E合酶1(mPGES1)过表达慢病毒载体;观察mPGES1基因过表达后对肝癌细胞Huh-7体外增殖、迁移侵袭以及体内成瘤能力的影响;检测过表达或下调mPGES1对肝癌细胞中前列腺素E2(PGE2)及其受体EP1、EP2、EP3和EP4表达水平的影响。探讨mPGES1调控PGE2及其受体的信号途径促进肝癌细胞增殖、迁移侵袭的可能机制。方法:(1)通过PCR特异性扩增目的基因mPGES1全长。纯化、酶切后与GV287载体连接得到目的基因重组质粒,与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,包装生产mPGES1过表达慢病毒载体(pGC-LV-mPGES1-GFP)。低温超速浓缩病毒液并检测病毒滴度。(2)使用构建的pGC-LV-mPGES1-GFP感染Huh-7细胞(过表达组),并设pGC-LV-NC-GFP(空载体组)组和未感染组。采用PCR、Western blot等方法鉴定mPGES1基因过表达后的mRNA、蛋白表达水平。采用MTT方法、基质黏附实验、Transwell迁移及侵袭实验及流式细胞技术检测mPGES1基因过表达前后Huh-7细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭以及细胞周期的变化;将三组细胞分别接种于裸鼠皮下,观察各组裸鼠移植瘤生长情况;第21d取瘤,肉眼和镜下观察移植瘤形态差别。(3)用酶联免疫吸附实验(Elisa法)检测过表达或下调mPGES1后肝癌细胞Huh-7或HepG2中PGE2表达水平变化,real-time PCR和Western blot检测过表达或下调mPGES1后肝癌细胞Huh-7或HepG2中PGE2受体EP1、EP2、EP3和EP4表达水平变化。结果:(1)成功构建过表达mPGES1的慢病毒载体(pGC-LV-mPGES1-GFP),测定病毒生物学滴度为2×108TU/mL。(2)与空载体组、未感染组相比,过表达组的mPGES1mRNA和蛋白表达明显升高。(3)与空载体组、未感染组相比,过表达mPGES1的Huh-7细胞体外增殖、黏附、侵袭和迁移能力均不同程度升高。(4)流式细胞术检测结果显示过表达mPGES1的Huh-7细胞处于S期的比例高于空载体组和未感染组。(5)裸鼠移植瘤模型建立过程中,过表达组移植瘤生长速度较其他两组快;接种后21d收获移植瘤,过表达组移植瘤体积及重量均大于其他两组。(6)与空载体组、未感染组相比,过表达mPGES1后Huh-7细胞中PGE2表达水平明显升高;PGE2的EP2表达水平明显升高,EP1、EP3和EP4表达三组中无明显差异。(7)与LV-mPGES1-NC组、control组相比,LV-mPGES1-shRNA下调mPGES1后HepG2细胞中PGE2表达水平明显下降;PGE2的EP2表达水平明显下降,EP1、EP3和EP4表达三组中无明显差异。结论:1.成功构建过表达mPGES1的慢病毒载体(pGC-LV-mPGES1-GFP),高效转染Huh-7细胞,可稳定、显著的提高mPGES1基因的表达。2. mPGES1基因过表达促进肝癌细胞体外的增殖、黏附及迁移侵袭能力,并且促进Huh-7细胞裸鼠体内成瘤。3. mPGES1可能通过调控PGE2-EP2途径促进肝癌细胞的恶性生物学行为。