番石榴酚类物质抗氧化和抗肿瘤活性研究

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番石榴(Psidium guajava L.)为桃金娘科(Myrtaces)番石榴属(Psidium)的一种热带水果,广泛分布在我国广东、台湾、广西、云南等省份。已有研究发现番石榴含有丰富的营养成份及天然活性成分,已被证实具有较强的抗炎症、抗氧化、抑菌、降血糖、抗肿瘤等生理活性。但之前的研究主要集中于番石榴叶的活性成分和生物活性,而对其可食用部位果肉的活性成分的研究少有报道,而关于不同品种及其果肉和果皮的活性成分及生理活性的比较分析方面的研究更少。基于此,本文将从番石榴果实出发,探索国内常见番石榴品种的果实的主要功能成分以及含量的测定,并且全面、系统的评价其提取物体外和细胞内的抗氧化活性以及抗肿瘤活性。首先,本文以华南地区极具代表性的四个番石榴品种(胭脂红、红心、白玉珍珠和珍珠)为研究对象,分别提取其果皮和果肉中游离型和结合型多酚,并对其总酚、总黄酮的含量进行测定,同时采HPLC法初步比较分析了番石榴果皮和果肉提取物中的活性成分。其中,游离型多酚的提取是采用80%的丙酮提取法;结合型多酚的提取,是采取Na OH消化结合乙酸乙酯萃取的方法;而总黄酮的测定是采用硼氢化钠-氯醌比色法(SBC法)。结果表明:番石榴果皮与果肉之间、不同品种之间的总多酚、总黄酮含量具有显著性差异(P<0.01)。总的来说红心番石榴要明显优于胭脂红、白玉珍珠和珍珠番石榴,而果皮提取物显著性优于果肉。红心番石榴的果皮和果肉提取物中的总酚含量分别为1080.25±65.33、448.66±81.4 mg galic acid/100 g FW,其总黄酮含量分别为505.1±6.8、212.52±7.07 mg catechin/100 g FW。而各个品种番石榴的提取物的高效液相色谱图较为复杂、吸收峰比较多且各品种之间主要吸收峰十分相似。其次,采用ORAC、PSC(Peroxyl radical Scavenging Capacity Assay)、ABTS以及FRAP四种体外的抗氧化活性测定方法,以及细胞内的抗氧化活性评价方法(CAA法),分别对不同品种番石榴果皮和果肉提取物进行了抗氧化能力的评价,旨在全面、系统的评价番石榴的抗氧化活性。结果表明:四种化学评价方法和CAA法对四个品种番石榴抗氧化能力的测定结果大体一致,均是红心番石榴果皮和果肉提取物的抗氧化活性均显著性的高于其他三个品种(P<0.01)。红心番石榴果皮提取物的ORAC值、PSC值、ABTS值和FRAP值分别为:9579.75±359.06μmol Trolox equiv./100 g FW、5519.29±77.66μmol Vit C equiv./100 g FW、5071.84±39.15μmol Trolox equiv./100 g FW和3152.86±9.45μmol Trolox equiv./100 g FW;其果肉的相应值为4630.35±109.72、2354.34±41.57、2892.99±11.03和1525.48±20.31。而在CAA实验中,其在PBS清洗和No PBS清洗的两种情况下果皮和果肉的CAA值分别为1241.9±113.46、310.48±25.34(No PBS wash)和258.73±20.67、74.99±6.78(PBS wash)μmol of quercetin equiv./100 g FW。但品种之间具体的强弱顺序几种方法之间有一定的差异性。此外番石榴提取物的总酚、总黄酮含量与上述几种抗氧化方法测定的抗氧化值之间均具有显著的相关性(r2>0.8)。最后,采用亚甲基染色法评价了四个品种番石榴果皮和果肉提取物对Hep G2肝癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞、MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞毒性和抗增殖作用。结果表明:在无毒性的测量浓度下,四个品种的番石榴果皮和果肉提取物对上述三种癌细胞均具有明显的抑制增殖作用,其中对Hep G2肝癌细胞的抑制作用最强。在四个品种中,红心番石榴抗增殖的EC50值最小,其果皮提取物对Hep G2、MCF-7和MDA-MB-231细胞的EC50值分别为4.47±0.4、8.03±0.45和8.26±0.33 mg/ml。其果肉提取物的相应EC50值为10.97±0.87、16.75±0.42和21.78±0.23 mg/ml。且四个品种的多酚与黄酮含量与其抗增殖的EC50值均具有显著相关性(r2>0.8)。
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