葡萄是世界四大水果之一,具有很高的经济价值。现广泛栽培的欧洲种葡萄(Vitis vinifera L.)抗病性较差,其品质和产量易受影响。随着我国设施葡萄栽培面积的持续增加,灰霉病成为影响葡萄品质和产量的一种主要病害。研究发现,茉莉素在植物响应腐生型病原菌侵染的过程中发挥着重要的作用。JAZ蛋白家族作为茉莉素信号转导途径中的重要元件,广泛参与调控由茉莉素所介导的生理反应。目前对于JAZ蛋白的研究主要集中在模式植物拟南芥中,而有关葡萄JAZ蛋白的研究还很少。本研究从抗灰霉病的中国野生山葡萄(Vitis amurensis)‘双优’中同源克隆了VaJAZ9基因及它的启动子,分析明确了该基因的特性和表达模式,并利用酵母双杂交技术筛选了互作蛋白,并进行了验证;构建了VaJAZ9基因的超表达和敲除载体,通过农杆菌介导法转化了欧洲葡萄无核白,获得转基因葡萄植株。取得的主要结果如下:1.VaJAZ9基因全长807 bp,编码268个氨基酸,生物信息学分析发现,在其氨基酸序列的中部及C端分别含有一个典型的TIFY/ZIM和Jas保守结构域。VaJAZ9与拟南芥At JAZ1/2、番茄Sl JAZ2亲缘关系较近,而与水稻中JAZ蛋白的关系较远。2.表达分析发现,VaJAZ9基因在葡萄的花、根和叶中表达量较高,而在茎和果实中的表达量较低。在接种灰霉菌及Me JA处理后,该基因被显著诱导。VaJAZ9的启动子共1362 bp,且该区域内包含有CGTCA-motif、TC-rich repeats、W-box和G-box等与胁迫有关的顺式作用元件。亚细胞定位分析发现,VaJAZ9作用于细胞核内。3.自激活试验表明,VaJAZ9不具备转录激活活性。利用酵母双杂交技术筛选了VaJAZ9的互作蛋白,并在酵母细胞中进行了回复验证,结果表明,VaJAZ9与Va RGA相互作用。4.以无核白的花药和体胚为外植体,从两种途径诱导胚性愈伤组织。克隆VaJAZ9基因编码区,构建超量表达载体;利用CRISPR/Cas9技术,构建了双靶点的基因编辑载体。通过农杆菌介导法将VaJAZ9过表达及基因编辑载体转化无核白葡萄原胚团,经抗生素筛选、幼苗萌发等过程,获得了转基因葡萄植株。