杨树口蘑培养条件的研究及其漆酶的初步分离纯化

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:xy255c
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漆酶能够利用的底物很多,且其可以催化酚类和芳胺类物质的氧化。自然界中分布着不同种类的漆酶,其中植物性漆酶分布较为广泛,并且食用菌是植物性漆酶的生产者之一。目前,漆酶在污水的处理、饮料的澄清、环境的保护和造纸工业中起着重要的作用。通过对实验室已有菌株的漆酶活性进行筛选后发现,野生菌株YK-1的漆酶活性较高。从形态上鉴定其子实体和菌丝体,同时进行18sDNAITS序列分析,将该菌株鉴定为杨树口蘑。通过菌丝体生长条件优化,确定了菌株YK-1生长的最适营养物质为:葡萄糖、酵母膏,并且C/N的比例为20:1;菌株生长的最适环境条件为28℃、pH7.0。经优化培养,菌丝体的日均伸长量为7.05mm/d。产酶特性试验结果表明,菌株YK-1的漆酶活性为(199.72±5.32)U/mL,凝集素的活性次之;蛋白酶的活性为(0.86±0.04)U/mL,α-半乳糖苷酶的活性为(0.04±0.01)U/mL,两者均较低,并且该菌株中无RNase活性。粗酶液经DEAE-Sepharose阴离子交换层析,纯化得到蛋白组分D4;然后经过CM-cellulose阳离子交换层析纯化得到蛋白组分CM4。最终,其纯化倍数为3.34,回收率为17.47%,比活力为34.81U/mg。研究纯化漆酶的酶学性质后发现,50℃时其漆酶活力最高,在温度小于40℃的情况下水浴1h,漆酶活性几乎不会受到影响。在60℃水浴1h,酶活力几乎消失。该漆酶的最适pH为4.0,且酶活在pH3.0-6.0范围内稳定。该漆酶不会受到Mg2+的影响,但是却会受到Fe2+的强烈抑制;低浓度的Cu2+会促进杨树口蘑漆酶活性的增高,高浓度的Cu2+对杨树口蘑漆酶活性有一定的抑制作用。抗坏血酸、草酸和EDTA可以强烈抑制漆酶活性,但是尿素对漆酶活性几乎无影响。此外,在以不同浓度的ABTS为底物的条件下,求得其Km 为 0.192mM,Vmax为 9.64μM min-1
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