论文部分内容阅读
乙烯作为植物体内五大内源激素之一，其对植物叶、花的衰败、果实成熟及生长发育等生理过程起着关键性的作用。源自微生物的ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid deaminase，ACDS)可以将乙烯生物合成的直接前体物(ACC)分解成α-丁酮酸和氨，从而有效抑制乙烯的生物生成。通过基因工程技术使ACDS基因在高等植物体内表达，有望达到延缓植物衰老进程、培育出耐贮运农产品及园艺产品新品种之目的。本实验利用农杆菌介导技术，开展ACDS对矮牵牛的遗传转化研究，获得如下主要结果：
1．建立了矮牵牛转基因再生体系。研究了不同激素水平下对矮牵牛再生体系的诱导效应，确定诱导分化的最适培养基为MS+BA 2.0+NAA 0.1，诱导生根的最适培养基为MS+IBA 1.0mg/L。
2．确定了卡那霉素和G418对矮牵牛的适宜筛选浓度，通过矮牵牛外植体对不同浓度抗生素的敏感性实验，得到的筛选浓度为：卡那100mg/L，G418 20mg/L。利用此浓度，对转化后矮牵牛进行抗性筛选。
3．初步建立了农杆菌叶盘法介导转基因体系，确定了预培养时间为6天，和农杆菌侵染时间为10min，最终获得抗性苗13株，其中，CaMV35S启动子植株4株，ChsA启动子9株。
4．通过对矮牵牛抗性苗PCR的检测，证明外源基因已经导入到矮牵牛中。