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研究背景狼疮性肾炎是由系统性红斑狼疮引起的肾小球肾炎,也是其最常见的临床表现和最主要的死亡原因之一,严重程度从无症状疾病到肾病综合征再到严重的肾脏损害,导致终末期肾脏疾病。肾血管病变是狼疮性肾炎常见的病理性病变,是狼疮性肾炎主要病死原因之一。狼疮性肾炎患者的生存质量差,死亡率高,经济负担重,对于病患和社会来说都是巨大的负担。面对这种疾病,采取的措施主要以预防该病发生和延缓病情进展、保护肾脏功能为主,所以患者的早期诊断和治疗对于预防该疾病发展成慢性肾衰竭至关重要,但确诊依赖于肾活检等有创检查,病人依从性不高,因此,找到一个可靠的能评估狼疮性肾炎活动性的生物标志物将有助于评估疾病活动以改善预后。本课题组前期的研究发现,系统性红斑狼疮患者中MicroRNA-145（miR-145）表达下调,并且随着肾脏病理损害加重呈递减趋势,提示miR-145参与了系统性红斑狼疮的发生发展过程。目的探讨miR-145在狼疮性肾炎患儿肾血管病变中的表达是否异常。研究miR-145对人血管平滑肌细胞（human vascular smooth muscle cells,HVSMCs）的表型的影响,以及产生影响的机制,进一步明确miR-145在狼疮性肾炎患儿中的作用,为临床诊断以及治疗提供新的思路与方法。方法（1）HVSMCs细胞放置在37℃,5%CO2的培养箱中培养至细胞密度达80%-90%进行传代备用。（2）构建LV-miR-145和LV-NC慢病毒过表达载体并分别转染到HVSMCs中,使用荧光显微镜观察,细胞见绿色荧光提示转染初步成功,持续2周用嘌呤霉素筛选已转染细胞,直到转染细胞稳定生长。（3）用10.0μg/L PDGF-BB处理HVSMCs后,提取细胞总RNA,反转录合成cDNA,使用荧光定量RT-PCR法检测miR-145的表达;（4）加入MTT液呈色,酶标仪上测定570nm下的吸光度值;（5）取处于绝对生长期的各组HVSMCs使用Transwell法处理,0.1%结晶紫染色15min,200 X的光学显微镜下随机选取5个视野计数穿过膜的细胞数并拍照;（6）PDGF-BB处理后的各组细胞使用流式细胞计数法检测凋亡情况;（7）收集待测细胞样品提取蛋白,使用WB法处理,进行化学发光显色,曝光、显影、定影,数据分析测定表型标志物α-SM-actin和骨桥蛋白在HVSMCs内的表达。（8）运用SPSS 19.0软件进行数据分析,p<0.05表示差异有显著性统计学意义。结果（1）PDGF-BB处理后,随着PDGF-BB浓度的增加,HVSMCs的增殖能力逐渐增加;（2）随着PDGF-BB浓度的增加,HVSMCs的miR-145的表达下降;（3）上调miR-145后,PDGF-BB诱导的HVSMCs的增殖能力下降;（4）上调miR-145后,PDGF-BB诱导的HVSMCs的迁移能力下降;（5）上调miR-145后,PDGF-BB诱导的HVSMCs的凋亡增加;（6）上调miR-145后,α-SM-肌动蛋白增加,骨桥蛋白下降。结论我们的研究表明,miR-145能抑制PDGF-BB诱导的HVSMCs的增殖、迁移,能增加PDGF-BB诱导的HVSMCs凋亡。miR-145使HVSMCs的表型由增殖型转变为收缩型。miR-145可能参与狼疮性肾炎血管损伤的发生与发展,并可能是治疗狼疮性肾炎中肾血管病变的新靶点。