多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊MHC-DRB、DQB基因PCR-RFLP多态性分析

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weichungchen
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主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)是由紧密连锁、高度多态的基因位点所组成的复合体,广泛存在于脊椎动物中。MHC的表达产物称为MHC抗原,是一类细胞表面的糖蛋白,MHC分子主要与外来抗原相结合并将这些抗原递呈给T淋巴细胞,最终引起机体的免疫反应,因此,在脊椎动物的免疫系统中起着重要的作用。MHC作为疾病的抗性和易感性的候选基因,已经成为当今分子免疫遗传的研究热点之一。绵羊的MHC又称为绵羊淋巴细胞表面抗原(Ovine Lymphocyte Antigen,OLA),位于绵羊的20号染色体上,分为Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类,其多态性集中在Ⅱ类区域的DR和DQ亚区的基因上,并且OLAⅡ类分子在免疫应答中起重要的调控作用。OLAⅡ类抗原有很多基因,但只有OLA-DR和OLA-DQ基因在蛋白质水平上表达,OLAⅡ类分子的DR和DQ亚区的DRB和DQB 2个基因位点所编码的MHC抗原在其免疫系统中发挥重要的作用,其第2外显子编码抗原的功能区(抗原结合区),具有丰富的多态性。本研究应用PCR-RFLP方法,对多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊OLA-DRB1和DQB基因外显子2的遗传多态性进行初步检测,目的是为今后绵羊抗病育种工作打下基础。应用巢式PCR-RFLP方法,对多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊OLA-DRB1基因外显子2进行了遗传检测,结果显示,多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊OLA-DRB1基因外显子2在SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ酶切位点存在多态性,其酶切位点分别由2、2和6种共显性等位基因控制,其中,等位基因HaeⅢE在多浪羊中出现的频率较高,在两绵羊品种之间差异显著,其他的基因频率均不显著。两个绵羊品种共检测到25种基因型,OLA-DRB1的各个基因型在两个品种中的分布不一致,多浪羊中检测到24种,中国美利奴(新疆军垦型)羊中检测到21种。SacⅠAB,Hin1ⅠAB,HaeⅢAB,HaeⅢAF HaeⅢCF和HaeⅢBE在多浪羊中出现的频率较高,HaeⅢAC,HaeⅢCD和HaeⅢAA在中国美利奴(新疆军垦型)羊中出现的频率较高,以上基因型的频率在两绵羊品种间差异显著或者极显著,其他的基因型频率差异均不显著。基因位点处于Hardy-Weinberg平衡对于群体遗传结构的稳定起着直接的保证作用。OLA-DRB1基因各酶切位点的Hardy-Weinberg平衡状态在品种间表现不一致,在SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ位点上,多浪羊均未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.01);中国美利奴(新疆军垦型)羊,在SacⅠ和Hin1Ⅰ位点上,达到Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),但是,在HaeⅢ位点上,未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。应用PCR-RFLP方法,同时对多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊OLA-DQB基因外显子2进行了遗传检测,结果显示,多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊OLA-DQB基因外显子2在TaqⅠ、HaeⅢ和MvaⅠ酶切位点存在多态性,其酶切位点分别由3、3和6种共显性等位基因控制,经过克隆测序证实, HaeⅢm、HaeⅢn、MvaⅠz和MvaⅠy是在多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊中发现的新等位基因。等位基因MvaⅠc和MvaⅠd在多浪羊中出现的频率较高,MvaⅠy在中国美利奴(新疆军垦型)羊中出现的频率较高,以上三个等位基因在两绵羊品种间频率差异显著或极显著,其他的等位基因频率差异不显著。两个绵羊品种共检测到26种基因型,OLA-DQB的各个基因型在两个品种中的分布不一致,多浪羊中检测到21种,中国美利奴(新疆军垦型)羊中检测到26种,其中,MvaⅠYY在中国美利奴(新疆军垦型)羊中出现的频率较高,MvaⅠCD在多浪羊中出现的频率较高,这两个基因型在两绵羊品种间频率差异极显著,其他基因型频率差异不显著。基因位点处于Hardy-Weinberg平衡对于群体遗传结构的稳定起着重要的保证作用。OLA-DQB基因各酶切位点的Hardy-Weinberg平衡状态在两品种间表现一致,χ2检验结果表明,多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊在TaqⅠ位点已经达到Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),但在HaeⅢ和MvaⅠ位点上均没有达到Hardy-Weinberg平衡(p<0.01)。
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