由于荧光分析法具有高灵敏度、操作方便、不损坏样品、检测快速的优点,基于荧光分析法的检测受到了越来越多的关注与应用。超分子组装是通过非共价键作用形成的具有一定结构和功能的多分子集团,本文将通过表面活性剂与聚电解质的静电和疏水作用形成的超分子组装与荧光分析法相结合。基于荧光分析法的超分子组装具有显著的优点,通过非共价作用将荧光传感器的外来物种的识别部分和荧光报告部分连接起来,避免了有机合成,制备简单,利于体系优化。本文基于超分子组装与解组装的原理,通过选用不同表面活性剂与聚电解质构建了三种超分子组装体用于荧光检测胰蛋白酶,具体内容如下:1.以尼罗红为荧光探针,通过带负电的表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)和带正电的鱼精蛋白(Protamine)之间的静电和疏水作用,构建了可用于检测胰蛋白酶及酶抑制剂的超分子组装体。荧光光谱和透射照片等实验结果表明,当SDS低于其临界胶束浓度时,通过静电和疏水作用与鱼精蛋白形成了高荧光发射的超分子组装体。由于胰蛋白酶对鱼精蛋白的水解作用,在组装体中加入胰蛋白酶,组装体解组装,疏水性荧光探针尼罗红被释放出来,尼罗红的荧光发射强度显著降低了,透射照片可证实该体系的解组装。该体系的检测限低至0.044ng·ml-1,达到或高于目前的检测胰蛋白酶的研究水平,且选择性较好,酶抑制剂的ic50为0.02mg·ml-1。底物与荧光探针对检测有一定的影响,鱼精蛋白是比八聚精氨酸(arg8)更有效的底物,这可能与鱼精蛋白的长链结构有关。香豆素6和芘也可能作为探针,但检测的灵敏度没有尼罗红的灵敏性优异。2.以尼罗红为荧光探针,通过带负电的gemini表面活性剂丙烷基-1,3-双(十二烷基丙磺酸钠)(c3c12c3(so3)2)和牛血清白蛋白(bsa)之间的静电和疏水作用,构建了可用于实际检测人体血清中胰蛋白酶的超分子组装体。通过荧光光谱和透射照片等表征手段表明,当c3c12c3(so3)2低于其临界胶束浓度时,通过静电和疏水作用与bsa形成了高荧光强度的超分子组装体。由于胰蛋白酶对bsa的水解作用,加入胰蛋白酶,组装体解组装,尼罗红被释放出来,此时体系的荧光强度较低。该体系胰蛋白酶的检测限低至1.6ng·ml-1,并且具有较好的选择性。同时还可以用于检测胰蛋白酶酶抑制剂,酶抑制剂的ic50为0.23mg·ml-1。由抗盐性实验可知,c3c12c3(so3)2/bsa组装体的抗盐性较好,可用于实际血清中胰蛋白酶的检测,回收实验验证了c3c12c3(so3)2/bsa/尼罗红检测体系具有良好的准确性和可靠性。3.以尼罗红为荧光探针,通过带正电的gemini表面活性剂乙撑基双(十二烷基二甲基溴化铵)(edab)和带负电的肝素钠(heparin)之间的静电和疏水作用,构建了EDAB/肝素钠/尼罗红的超分子组装体,以鱼精蛋白为胰蛋白酶的检测底物,进一步构建了一种以“荧光开”方式用于实际检测人体血清中胰蛋白酶的检测体系。由于鱼精蛋白对肝素钠的特异性作用大于EDAB,在EDAB/肝素钠/尼罗红的组装体中加入鱼精蛋白,荧光强度降低,通过荧光光谱和透射电镜照片证实组装体解组装。由于胰蛋白酶对鱼精蛋白的水解作用,加入胰蛋白酶,又形成了高荧光发射的EDAB/肝素钠/尼罗红组装体。胰蛋白酶的检测限低至4.2 ng·mL-1,并且具有较好的选择性,同时还可以用于检测胰蛋白酶酶抑制剂,酶抑制剂的IC50为0.41 mg·mL-1。抗盐性实验证明,该体系抗盐性较好,可用于检测人体血清中的胰蛋白酶,回收实验验证了EDAB/肝素钠/尼罗红的超分子组装体系具有良好的准确性和可靠性。