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以斑马鱼胚胎作为研究对象,采用差异荧光凝胶电泳DIGE技术、质谱技术和基因芯片与荧光定量PCR技术,在蛋白质组学、转录组学与生物信息学水平上去探究高效氯氰菊酯农药对斑马鱼发育的毒性机制,本研究完成以下工作:以丙酮为助溶剂,配制丙酮对照、0、0.05、0.1、0.2、0.6、1mg/L七个梯度浓度的高效氯氰菊酯溶液,对斑马鱼胚胎进行72h毒性处理,在显微镜下观察其对斑马鱼发育、形态变化和孵化率的影响。与对照组相比较,经高效氯氰菊酯溶液处理的胚胎会表现出不同程度的毒性反应,包括体轴弯曲、心包囊肿、独眼等。研究表明,高效氯氰菊酯农药可以促进斑马鱼胚胎的孵化,减少孵化时间,还对斑马鱼的胚胎产生严重致畸效应,这种致畸效应呈现一定的剂量依赖关系。根据毒理实验结果,选用0.05mg/L的高效氯氰菊酯溶液对斑马鱼胚胎进行处理,在受精后24h(24hpf)进行胚胎收集,用来进行斑马鱼胚胎差异蛋白质组学研究。共获得77个差异表达的蛋白质点,并成功鉴定了其中55个。这些蛋白质的功能共分六大类,包括催化功能、结构分子功能、结合功能、电子转运功能、转录调节功能和分子传导功能。这些差异蛋白质涉及多个重要的生物代谢通路,包括信号传导、糖降解、肌醇代谢、氨基酸代谢、固碳作用、氧化磷酸化和MAPK信号转导等。这些差异蛋白质在生命活动中发挥着重要作用,它们的异常表达严重影响斑马鱼机体发育。选用0.05mg/L高效氯氰菊酯溶液对斑马鱼胚胎进行处理,在受精后48hpf时进行胚胎收集,利用斑马鱼基因芯片进行杂交,筛选差异表达的基因。对这些差异表达的基因进行聚类分析,结果发现,差异值大于1.5倍条件下,有409个mRNA存在显著差异,其中121个mRNA显著上调,288个mRNA显著下调。差异值大于2倍条件下,有40个mRNA存在显著差异,其中5个mRNA显著上调,35个mRNA显著下调。实时定量PCR实验结果与芯片结果基本保持一致。在差异表达显著的基因中,按产物功能分类,包括催化功能、结构分子功能、转运功能、结合功能、电子转运功能、抗氧化活性功能、酶活性调节功能、转录调节功能和分子传导功能。大部分基因是肿瘤因子、应激因子、凋亡因子、生长因子和免疫因子等,这些差异基因也涉及多个重要的生物代谢通路,包括MAPK信号转导通路、细胞色素P450引起的外源物质代谢、花生四烯酸代谢通路、视黄醇代谢通路、氨基酸代谢、柠檬酸循环、Wnt信号通路等。继而分析junD基因在12hpf、24hpf、48hpf、72hpf和96hpf表达情况,发现junD基因在12hpf、24hpf、72hpf和96hpf时间点时,呈现显著下调表达,而在48hpf时却截然相反,呈现显著上调表达。这些基因会引起了斑马鱼肿瘤的发生并抑制了斑马鱼的免疫功能。