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目的:研究miR-597在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)发生发展中发挥的作用,以及其通过调控14-3-3σ(Stratifin,即SFN)对鼻咽癌细胞上皮间质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)以及迁移侵袭的影响。方法:(1)生物信息学方法分析预测与SFN结合最可能的miRNA分子,主要通过miRwalk在线软件对miRNA-SFN之间的结合进行分析和预测,通过miRanda软件进行热力学稳定性和序列保守性评分分析,获取可与SFN靶向结合的最佳miRNA。(2)Western blot检测14-3-3σ蛋白在不同转移潜能鼻咽癌细胞系6-10B、5-8F,不同分化潜能鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2四组细胞系中的表达水平;并通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测miR-597在四组鼻咽癌细胞系中的表达水平,分析14-3-3σ和miR-597与不同转移分化水平鼻咽癌细胞系的相关性。(3)通过构建SFN-WT野生型载体及SFN-Mut突变型载体,运用双荧光素酶报告基因系统检测miR-597是否靶向结合SFN 3’-UTR,从而分析SFN是否是miR-597的靶基因。(4)通过瞬时转染miR-597 mimic,miR-597 inhibitor及相应阴性对照miR-597mimic NC,miR-597 inhibitor NC到鼻咽癌细胞系6-10B,western blot检测miR-597高表达及低表达鼻咽癌细胞中14-3-3σ蛋白的表达水平,分析miR-597对14-3-3σ蛋白的调控作用。(5)通过Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin在转染miR-597 mimic和inhibitor以及相应对照组的鼻咽癌细胞系6-10B中的表达情况,分析miR-597的表达对鼻咽癌EMT的影响。(6)通过划痕实验和Transwell迁移侵袭实验来验证miR-597表达的改变对鼻咽癌细胞迁移侵袭的影响。结果:1.生物信息学方法发现符合条件的miRNAs有5个:miR-220c、miR-597、miR-362-3p、miR-329、miR-922。其中,miR-597的序列保守性最好,结合稳定性最强,miR-597是最可能与SFN结合的miRNA。2.Targetscan软件预测发现miR-597与SFN的结合位点位于SFN基因的489-495碱基,其结合序列为5’-GUGACAC-3’,与miR-597部分序列一致。3.14-3-3σ蛋白的表达水平在低分化鼻咽癌细胞系CNE2中的表达水平较高分化鼻咽癌细胞系CNE 1明显下调(P<0.05);与低转移鼻咽癌细胞系6-10B相比,14-3-3σ蛋白在高转移鼻咽癌细胞系5-8F中的表达水平明显下调(P<0.05)。4.miR-597的表达水平在高转移鼻咽癌细胞系5-8F中高于低转移的6-10B细胞系(P<0.05),在低分化细胞系CNE2中高于高分化细胞系CNE1(P<0.05)。5.双荧光素酶报告显示miR-597 mimic能显著抑制SFN野生型载体的荧光强度,miR-597 mimic与SFN突变型载体结合后,miR-597 mimic对突变型载体中荧光强度的抑制程度显著降低,突变型载体中的报告荧光基本恢复。6.miR-597 mimic中14-3-3σ蛋白表达量低于miR-597 mimic NC和未转染组(P<0.05),而miR-597 inhibitor中14-3-3σ蛋白表达量高于miR-597 inhibitor NC和未转染组(P<0.05)。7.细胞划痕实验结果显示,miR-597 mimic的迁移距离高于miR-597 mimicNC以及未转染组(P<0.05)。miR-597 inhibitor迁移距离低于miR-597inhibitor NC以及未转染组(P<0.05)。8.Trasnwell迁移实验结果显示,miR-597 mimic的迁移细胞数量高于miR-597mimic NC以及未转染组(P<0.05)。同样,miR-597 inhibitor迁移细胞数量低于miR-597 inhibitor NC和未转染组(P<0.05)。9.Trasnwell侵袭实验结果显示,miR-597 mimic的侵袭细胞数量高于miR-597mimic NC以及未转染组(P<0.05)。miR-597 inhibitor侵袭细胞数量低于miR-597 inhibitor NC和未转染组(P<0.05)。10.与miR-597 mimic NC和未转染组比较,miR-597 mimic显著降低E-cadherin的表达,但增加了Vimentin的表达(P<0.05);与上调结果相一致,miR-597 inhibitor使E-cadherin的表达增加,Vimentin的表达下调(P<0.05)。结论:(1)在鼻咽癌细胞系中14-3-3σ低表达,miR-597高表达,两者的表达与鼻咽癌细胞的转移分化密切相关。(2)在鼻咽癌细胞系中miR-597过表达,14-3-3σ的表达减少;下调miR-597的表达,14-3-3σ表达增加,两者表达具有相关性。(3)miR-597能与SFN的3’-UTR结合,SFN是miR-597的靶基因;miR-597负调控SFN促进鼻咽癌细胞的迁移侵袭。