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【背景】丹参酮ⅡA是从植物丹参的根部提取所得的药物,因其具有改善循环、扩张血管、修复血管内皮损伤等作用,临床上常用丹参酮ⅡA来治疗心脑血管相关的疾病。随着人们对丹参酮ⅡA的进一步研究发现,丹参酮ⅡA参与调控神经细胞的水平。细胞的自噬,也称为细胞自身的正常死亡。在正常生理条件下,细胞自噬水平比较微弱,主要用来吞噬已经衰老的细胞器和某些蛋白质等物质。但当机体受到异常的生理性刺激或是病理性刺激时,细胞调控自噬水平上升,将会损伤细胞器,并且对细胞的正常结构等造成重大影响,严重者会使机体正常细胞发生死亡。这也为治疗的药物研究提供靶点。目前已经有文献发现在脑缺血后,细胞自噬出现活跃异常表现而导致正常组织死亡的现象。众所周知,PI3K/Akt/mTOR通路具有对细胞的增殖、生长、分化、生存等的重要调节作用,丹参酮ⅡA对其有重要的调控作用。在人们对自噬信号通路的不断研究中发现,PTEN,作为一种肿瘤抑制基因,在自噬过程中通过调控PI3K的激活起到了重要作用,但无相关研究反映在脑缺血后PTEN-PI3K/AKT/mTOR自噬水平的表达情况。所以通过验证PTEN在脑缺血后对自噬信号的调节作用,从而进一步了解丹参酮ⅡA对自噬信号通路的深入影响。【目的】探究丹参酮ⅡA对在大鼠发生脑缺血后自噬PTEN-PI3K/AKT/mTOR信号的影响机制。【方法】根据需要选择体重在250-280g健康的雄性大鼠30只,进行随机分组,即:手术组20只(加药组和加生理盐水组)和假手术组10只。将所有大鼠按照饲养条件进行饲养4天。手术组两组的一组在饲养期间予丹参酮ⅡA饲养,标记为MCAO+TSA组,而手术组中另一组给予生理盐水,即MCAO+NS组;假手术组与MCAO+NS组在同样的条件下饲养。手术组SD大鼠均进行建立MCAO模型操作后,根据要求在1天、3天、7天进行取脑。手术组的大鼠在模型建成期间,利用Zea Longa的评分,对进行手术的实验鼠进行打分;纳入评分要求为:2-3分。通过免疫组分别检测PTEN、自噬分子的表达情况。利用Western Blot技术来检测PI3K、PTEN、PI3K、AKT、mTOR的表达水平。【结果】1.通过行为学评分可以发现:手术组中,MCAO+TSA组的大鼠评分较MCAO+NS组的大鼠评分低,说明在给予丹参酮ⅡA组的大鼠发生脑梗塞与给予生理盐水组比较,行为学评分有显著性差异。2.通过免疫组化对不同蛋白的镜下观察发现:(1)非手术组与MCAO+NS组相比:非手术组PTEN蛋白的表达数较MCAO+NS组高,而MCAO+NS组PI3K、AKT、mTOR自噬蛋白的表达水平数显著增高,差异具有统计学意义;(2)手术组大鼠的蛋白水平跟假手术组相比:手术大鼠PTEN蛋白的表达数较非手术组的表达数明显减少;手术组中的PI3K、AKT、mTOR蛋白较非手术组各蛋白的表达数显著增加。(3)手术组中,MCAO+TSA组中的蛋白PTEN较MCAO+NS组表达数多;而MCAO+TSA组中PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达数较MCAO+NS组小,且差异具有统计学意义。3.通过WB法进行蛋白表达发现:(1)非手术组与MCAO+NS组相比:在假手术组中,大鼠的蛋白PTEN表达较高水平,而自噬蛋白PI3K、AKT、mTOR的表达则较低,差异具有统计学意义;(2)手术组与假手术组进行比较:手术组中蛋白PTEN表达明显减少;但蛋白PI3K、AKT、mTOR表达水平显著增高。(3)手术组中,MCAO+TSA组中的蛋白PTEN较MCAO+NS组表达水平增加;MCAO+TSA组中PI3K、AKT、mTOR蛋白较MCAO+NS组的表达水平减低,且差异具有统计学意义。【结论】1.在大鼠发生脑梗死后,信号通路PTEN-PI3K/AKT/mTOR的表达增加;2.丹参酮IIA通过增强脑梗死大鼠PTEN的表达,降低自噬信号通路PI3K/AKT/mTOR的表达水平,从而减轻大鼠脑组织炎症炎症的发生,起到保护大鼠脑功能的作用。