黑皮鸡枞总黄酮提取工艺优化及功效成分鉴定

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黑皮鸡枞(Oudemansiella raphanipes)又名长根菇、卵孢小奥德蘑,其味道鲜美、营养丰富,是一种具有较高经济价值的食药用菌。黑皮鸡枞含有天然类黄酮类化合物,具有显著的抗氧化、降血糖等作用。本论文首次对黑皮鸡枞中总黄酮提取工艺进行响应面试验优化、对不同极性溶剂萃取层黄酮含量、抗氧化能力及降血糖能力进行比较分析,并对不同极性溶剂萃取层类黄酮的组成及含量进行靶向代谢组鉴定,旨在为提升黑皮鸡枞的经济价值和促进黑皮鸡枞的高效开发利用提供科学依据。(1)首先探讨了乙醇浓度、料液比、超声时间及超声温度四种单因素对提取黑皮鸡枞总黄酮的影响,通过单因素和响应面试验优化提取工艺,得到最佳条件为:乙醇浓度82%,液料比42:1(m L/g),超声时间117 min,超声温度70℃。此条件下黑皮鸡枞总黄酮提取量达到4.89 mg/g。(2)利用不同有机溶剂极性不同原理,依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶剂萃取分离所提取的黑皮鸡枞总黄酮,分离得到四种不同萃取部位:石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层及水层。结合体外抗氧化试验(DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、总抗氧化能力(FRAP法))和体外降血糖试验(抑制α-葡萄糖苷酶活性、抑制α-淀粉酶活性)分析,结果显示各个萃取层均具有一定的抗氧化能力和降血糖能力。其中乙酸乙酯层的总抗氧化能力,及对DPPH自由基、ABTS自由基清除能力均是最强的;α-葡萄糖苷酶抑制活性大小依次为:乙酸乙酯层>石油醚层>正丁醇层>水层;α-淀粉酶抑制活性大小依次为:乙酸乙酯层>正丁醇层>水层>石油醚层。说明黑皮鸡枞乙酸乙酯萃取层提取物的功效活性最强。(3)通过靶向亲和-液质联用(Target molecule affinity-LC-MS)技术对黑皮鸡枞总黄酮不同极性溶剂萃取层进行类黄酮检测分析,这4种萃取层一共测定出77种黄酮类化合物,包括5种查尔酮和二氢查尔酮,6种花青素,39种黄酮和黄酮醇,12种黄烷酮,5种类黄酮,10种异黄酮。靶向代谢组学结果揭示黑皮鸡枞乙酸乙酯层黄酮类化合物含量最高的代谢物为黄酮和黄酮醇,占比67.60%。乙酸乙酯层较其他萃取层显著富集的4种黄酮类代谢物甲基橙皮苷、根皮素、漆黄素、木犀草素可能是黑皮鸡枞抗氧化和降血糖的主要成分。
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