从2018年8月到2019年9月期间,某大型白羽肉鸡养殖公司的肉鸡场持续出现幼龄肉鸡感染副鸡禽杆菌发生传染性鼻炎的现象。本研究从白羽肉鸡场发病鸡群病鸡中分离鉴定出B型副鸡禽杆菌,通过血凝素基因测序,分析其变异情况,开展了免疫原性研究,显示其具有良好的免疫原性,通过连续传代培养验证其致病性和免疫原性稳定,可以作为疫苗备选株型,为副鸡禽杆菌三价疫苗的制备提供基础。其主要研究内容如下。1副鸡禽杆菌的分离鉴定从不同批次发生鸡传染性鼻炎疑似症状的鸡体内分离细菌,经细菌分离、纯化、回鸡试验,共分离到8株细菌,经形态及培养特性、血清学特性、生化试验、PCR方法、16S rRNA基因序列分析等方法对分离的细菌进行鉴定。结果表明所分离得细菌有1株为A型副鸡禽杆菌,7株为B型副鸡禽杆菌,说明本次鸡传染性鼻炎的流行中B型致病株是优势毒株。鉴于持续发病鸡群是幼龄肉鸡也说明我国鸡传染性鼻炎的流行出现了新的特点。2分离株血凝素基因序列及遗传进化分析对从肉鸡场分离出的B型AH-1株的血凝素基因进行了克隆,测定了其血凝素基因序列,从血凝素基因的水平上对本次疫情的分离株进行了分析,与已发表的参考株和其他分离株的序列进行了比较,结果表明本次的AH-1株的血凝素基因与B型参考株0222的同源性为96.2%,进化树分析处在不同的进化支上,而与国内B型分离株DL-1的同源性是99.8%,进化树分析处在同一进化支上,但是也看到AH-1株与DL-1株有所变异,而与TJ-1株的同源性是100%,处在同一进化支,在血凝素基因上未有变化。表明我国的鸡传染性鼻炎的B型菌株已有部分变异。3 AH-1株毒力测定及免疫原性研究本研究测定了 AH-1株菌在5-6日龄鸡胚及35-40日龄SPF鸡的毒力,用AH-1株菌制备免疫原,用攻毒的方法测定该菌株的免疫原性,同时还对本菌制备的抗原及目前国内、国外市场上销售的鸡传染性鼻炎A型、B型、C型三价或者二价灭活疫苗的免疫效力进行比较。毒力试验结果表明,AH-1株毒力比传染性鼻炎A型、C型二价灭活疫苗的检验用毒株A型、C型毒力均强。免疫原性试验结果表明本菌制备的抗原免疫鸡能抵抗AH-1株的攻击,说明本菌的免疫原性良好,而市场上销售的3个鸡传染性鼻炎三价（二价）灭活疫苗无法抵抗本菌的攻击,说明目前市场上销售的疫苗A、C型毒株对本菌在血清型间的交叉保护效果很差,疫苗B型毒株对本菌在血清型内的交叉保护效果也不好,显示分离菌和疫苗毒株之间的抗原性存在差异。通过连续传代培养并选取第10、20、30代的传代菌再次做毒力和免疫原性实验,结果表明传代株毒力和免疫原性未出现可见的变化,显示该菌具有良好的稳定性,可以作为备选疫苗菌。