MiRNA是在转录后水平负调节靶基因表达的非编码小分子RNA,它们已经成为新陈代谢、免疫和癌症等过程中的重要调节因子,可通过调节其靶基因的表达,参与肥胖、动脉粥样硬化、脂肪肝、糖尿病等重要代谢疾病。实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）是一种最准确、最方便的定量检测miRNA的方法,但是对于qRT-PCR而言,合适的参考基因在数据结果的标准化中起着至关重要的作用。因此内参基因的严谨性成为制约其定量结果准确性的关键因素。团头鲂（Megalobrama amblycephala）是我国特有的草食性经济鱼类,人工养殖状态下由于高糖或高脂饲料的应用,极易发生糖脂代谢紊乱。团头鲂miRNA定量PCR检测方面,参考基因的筛选工作至今未见报道。鉴于此,本论文以团头鲂为试验对象,考查不同应激条件下和不同组织中的10种miRNA候选参考基因的稳定性,为团头鲂miRNA定量检测的内参选择提供科学依据。并进一步以miR-30c为研究目标,通过团头鲂体内注射miR-30c类似物的方法,探讨其影响脂肪代谢的分子机制。试验内容共分两个部分:1团头鲂qRT-PCR中miRNA内参的选择及其在miR-34a/Sirtuin-1调控通路分析上的应用本研究的目的是筛选最稳定的miRNA参考基因,并在团头鲂能量代谢通路miR-34a/Sirtuin-1分析中进行验证。首先选取团头鲂（初始平均体重为15±2g）正常条件下的9个组织（大脑、肌肉、肝脏、皮肤、脾脏、心脏、鳃、肠和眼）和4种应激条件（高温应激、氨氮应激、细菌攻毒和糖脂胁迫）下的3个组织（肝、肠和脾）中,采用无参的qRT-PCR法分别评价了 10个候选参考基因（miR-21-1-5p、miR-107a-3p、miR-222a-3p、miR-146a-5p、miR-101a-3p、miR-22a-3p、miR-103-3p、miR-456-3p、miR-221-3p和U6）的稳定性。接着在4个应激试验中,每个试验都采用动态采样的方法分别于0h、3 h、6h、12h和24 h时间点采样,其中将0h时间点作为对照组进行分析。所有数据分别使用GeNorm、NormFinder和RefFinder 3个软件进行分析,每个软件得出的结果略有差异,综合考虑所有结果,我们发现不同的组织和应激是影响miRNA表达稳定性的重要因素。初步筛选出最适的内参基因后,我们进行了高糖饲料诱导的团头鲂中miR-34a/sirtuin-1调控通路分析的验证试验,结果表明,使用稳定性最好的miR-221-3p和miR-103-3p作为内参基因时,得出的结论与事实相符合;而使用稳定性最差的miR-146a-5p作为内参基因时,得出的结论与结果不符。本实验是第一篇系统筛选并验证团头鲂最适miRNA内参基因的研究,我们最终确定了该物种中最稳定的参考基因是miR-221-3p,参考基因的最佳组合是miR-221-3p和miR-103-3p。2 miR-30c在团头鲂脂代谢中的调控作用本实验的研究目的是探讨miR-30c在脂代谢过程中发挥的调控作用。实验以团头鲂幼鱼作为实验动物,选取规格大小齐整的16尾团头鲂（初始平均体重为15±1g）,随机分为4组,每组4条鱼。对各组试验鱼进行腹腔注射miR-30c agomir（类似物）,各组miR-30c agomir的注射浓度分别为:0、20、40和60mg/kg,其中0 mg/kg作为对照组,进行为期48 h的试验。试验结束后采样,测定团头鲂肝脏和血液中的相关生理生化指标,以及肝脏中脂代谢相关基因的表达情况。结果显示,与对照组相比,注射miR-30c agomir后,胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和游离脂肪酸含量显著下降（p<0.05）,随注射浓度的升高呈现出负反馈的趋势;与对照组相比,注射miR-30c agomir后脂代谢相关基因的表达量也显著下降（p<0.05）。本实验的结果在动物体内水平上验证了 miR-30c对FAS等基因具有负调控的作用,且miR-30c可以通过调控脂代谢相关基因的表达达到对脂代谢过程的调控作用。