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以鸭胚尿囊腔途径增殖鸭腺病毒,24-120 h死亡鸭胚和120 h后未死亡鸭胚置4℃冰箱过夜,无菌操作分别收集尿囊液。对鸭腺病毒连续传代,选择传代稳定的鸭胚尿囊液作为种毒,种毒鸭胚半数感染量为10-751/0.2ml, HA价1：216。用种毒制备疫苗抗原,加0.3%甲醛、37℃灭活48 h,加蜂胶佐剂,制备鸭腺病毒蜂胶灭活苗,蜂胶最终含量10mg/ml,疫苗安全检验合格。建立了间接ELISA法检测鸭腺病毒抗体。ELISA最佳反应条件为：鸭腺病毒抗原包被浓度2.45μg/ml,血清稀释倍数1：100,作用时间90 min。HRP-羊抗鸭IgG稀释度为1:2000。用32份阴性血清测得临界值为0.2310。建立的ELISA方法重复性好,板内变异系数1.09%-2.67%,板间变异系数2.79-4.06%,均小于10%。建立的方法与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、沙门氏菌阳性血清无交叉反应,特异性好。用制备的鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗免疫实验鸭,以间接ELISA和血凝抑制试验监测免疫鸭抗体消长规律。ELISA结果显示：一次免疫组种鸭免疫后第3d就可在血清中检测到血清呈阳性,第14d时抗体达到峰值(OD=0.628)随后缓慢下降,到免疫后56天仍为阳性；二次免疫组种鸭首免后第7d免疫第二次,共免疫2次,21d到达峰值(0.759)。结果显示：同时间点所测二次免疫组的OD450值显著高于一次免疫组(P<0.05),经过二次免疫种鸭的抗体水平更高。免疫组的抗体水平显著高于对照组(P<0.05)。血凝抑制试验结果显示：一免后第3d时可以检测到抗体效价,值为23.83。在免疫后的3 d-14 d抗体上升的最快,并达到最大值211.52,然后开始缓慢下降,到免疫后56 d抗体效价任保持在29.38的较高水平。在首免后第7d进行二次免疫,结果显示,在首免后第21d达到峰值,效价高达216。以后缓慢下降,56 d时的抗体效价为21330。在测定的整个过程,同时间点二次免疫组的抗体水平都高于一次免疫组,两个实验组的抗体水平都显著高于生理盐水对照组。ELISA法的敏感性高于血凝抑制试验方法,两者呈平行关系。用制备的鸭腺病毒蜂胶灭活疫苗免疫实验鸭,以MTT法和白细胞吞噬试验监测免疫鸭细胞免疫应答。MTT法检测鸭外周血淋巴细胞转化活性结果显示：一次免疫组在免疫后第3 d检测发现T淋巴细胞对ConA反应增强,且显著高于对照组(P<0.05)。到第10d到达峰值,然后快速下降。二次免疫组在首免后10-14 d,T淋巴细胞转化活性最高,随后逐渐下降。在本实验的整个测定过程中,在首免后第10d、 14d、21d、28d二次免疫组的转化率显著高于一次免疫组(P<0.05)和对照组(P<0.05),在42 d时两个试验组和对照组差异均不显著。白细胞吞噬试验结果显示：一次免疫组白细胞吞噬指数在免疫后21d达到最大值,吞噬指数为3.03,然后快速下降。二次免疫组白细胞吞噬指数一直大于一次免疫组和对照组,并且在首免后21 d到达最大值。