中药叶下珠抗血管生成作用的筛选及机理研究

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第一部分具有抗血管生成作用中药的筛选[目的]选取叶下珠、山海螺等10种中药醇提物体外作用于人肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人肠癌Lovo细胞、人胃癌MKN-28细胞、人乳癌MCF-7细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),筛选出有明显差异细胞毒性的中药。[方法]采用MTT法检测10种中药醇提物对人肺癌、肝癌、肠癌、胃癌、乳癌细胞和HUVEC增殖的抑制作用,采用生长曲线测定法检测10种中药醇提物对体外培养的肿瘤细胞和HUVEC差异性细胞毒作用。筛选出对实验药物最敏感的肿瘤细胞株及对HUVEC有差异细胞毒性的中药。[结果]对实验药物最为敏感的肿瘤细胞株为人肠癌Lovo细胞。叶下珠醇提物在对肿瘤细胞亚细胞毒浓度下作用于HUVEC有明显的增殖抑制作用(P值为0.001)。[结论]十味中药中叶下珠醇提物在10-320μg/ml浓度对肿瘤细胞和HUVEC有明显的差异性细胞毒作用,药物对HUVEC增殖的抑制作用在48小时最为明显,并呈现出较好的剂量依赖关系。第二部分叶下珠醇提物体外对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响[目的]研究叶下珠醇提物体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移作用和对小管形成形态的影响。[方法]采用Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验,观察实验药物对HUVEC的迁移及体外小管形成的影响。[结果]叶下珠醇提物10-80μg/ml对HUVEC作用12h后能够显著减少HUVEC迁移的数目,对其迁移具有一定的抑制作用,10、20、40、80μg/ml浓度时抑制率分别为14.76%、30.86%、42.76%、69.85%,不同剂量的重楼醇提物组间有显著差异(F=156.31,P=0.000)。叶下珠醇提物作用24h后能够破坏HUVEC形成的管腔样结构,且与对照组相比小管数目明显减少。[结论]叶下珠醇提物在体外具有一定的抗血管生成作用,其机制可能与抑制HUVEC迁移、干扰小管形成有关。第三部分叶下珠醇提物对鸡胚体内血管生成作用的实验研究[目的]研究叶下珠醇提物体的内抗血管生成作用。[方法]采用鸡胚尿囊膜(chickchorio allantoic membrane,CAM)模型观察叶下珠醇提物体内对血管生成作用的影响。[结果]加入实验药物72h后鸡胚尿囊膜中载体周围血管生长受到抑制,10、20、40、80μg/ml的叶下珠醇提物对CAM新生血管的抑制率分别为21.60%、28.67%、36.39%、63.56%,不同剂量的叶下珠醇提物组间有显著差异(F=76.18,P=0.000)。[结论]叶下珠醇提物在10-80μg/ml浓度时对CAM新生血管具有一定的抑制作用。
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