【摘 要】
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人核糖核酸酶抑制因子（Human Ribonuclease Inhibitor, hRI）是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白,分子量为50kD,其基因位于染色体11p15.5,三级结构呈对称的马蹄型。hRI是核糖核酸酶A（Ribonuclease A, RNase A）的抑制剂,可以有效地抑制其对RNA的水解作用。血管生成因子（Angiogenin,Ang）属RNase A超家族成员。根
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人核糖核酸酶抑制因子（Human Ribonuclease Inhibitor, hRI）是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白,分子量为50kD,其基因位于染色体11p15.5,三级结构呈对称的马蹄型。hRI是核糖核酸酶A（Ribonuclease A, RNase A）的抑制剂,可以有效地抑制其对RNA的水解作用。血管生成因子（Angiogenin,Ang）属RNase A超家族成员。根据cDNA序列分析,Ang与RNase A有35%的同源性。hRI能与Ang以1:1的化学剂量紧密结合(Ki=7.1×10-16M)。动物实验进一步证实,hRI具有抑制动物体内移植瘤生长的作用。本实验室前期已进行了大量的工作,我们从人胎盘和猪肝中提取hRI,给予荷瘤小鼠后可以抑制乳腺癌实体瘤Ca761,肉瘤S180的生长。从组织中提取的该蛋白产量较少,成本高,不宜大批量生产,生产工艺复杂,化学性质不稳定,生物半衰期短,成为其临床应用的瓶颈。本试验针对其特点,给单体RI蛋白加上谷胱甘肽转移酶（GST）标签,构建成融合表达蛋白（GST-hRI）,并将二者进行对比。结果发现融合蛋白（GST-hRI）无论在活性保持,半衰期延长方面都有显著提高;探索最优条件下融合蛋白（GST-hRI）的可溶性表达及其生物学作用。同时将上述纯化的GST-hRI用于动物实验,将BALB/C小鼠接种肝癌H22后,用该蛋白质进行处理。通过荷瘤小鼠抑瘤实验结果表明,治疗组的血管计数、肿瘤大小及恶性程度与空白组有显著差异。同时融合蛋白（GST-hRI）和RI组两种蛋白之间疗效上也有差异。将七天龄鸡胚分别施以GST-RI和hRI以检测其生物学作用,结果发现两者明显抑制鸡胚血管生成,并存在差异。
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