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目的:肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。但由于早期诊断困难,大多患者一经确诊即为晚期,失去了手术的机会,故化疗为主的综合治疗是晚期肺癌患者的主要治疗手段。但在化疗过程中,由于MDR现象的存在,严重影响了临床化疗的效果。为了进一步了解肿瘤耐药的相关机制,进而可以针对各种复杂的耐药肿瘤开发新的手段逆转耐药。本实验通过14 C-葡萄糖代谢测量方法,探讨了肺癌细胞与肺癌紫杉醇耐药细胞株间不同葡萄糖代谢通路的差异及DC A对其影响,以期为研究肿瘤细胞葡萄糖代谢与肿瘤发生、发展和治疗的关系奠定基础。 方法:1)用Beckman LS6500液体闪烁仪分别检测不同14C葡萄糖放射性活度下和不同葡萄糖本底浓度下 CO2放射性计数值的变化。同时用液体闪烁仪分别检测A549细胞和G6PD缺陷型A549细胞以及A549细胞和线粒体DNA缺失型A549细胞摄取14C葡萄糖后CO2产生的差异。2)首先采用CCK-8法检测DCA对A549细胞及A549/ta xo l细胞增殖的影响以及这两株细胞的紫杉醇耐药性。再用液体闪烁仪检测A549细胞和A549/taxol细胞摄取14C葡萄糖后CO2的产生、脂质的生成和核酸的生成的差异以及DC A对其影响。另外,分别用γ计数器和乳酸测定试剂盒检测A549细胞和A549/taxol细胞18F-FDG的摄取和乳酸的产生以及DC A对其影响。 结果:1)培养基中葡萄糖本底浓度一定的条件下,CO2放射性计数值随着14C葡萄糖放射性活度的增加而增加,两者之间呈线性。加入的14 C葡萄糖放射性活度一定的条件下,C O2放射性计数值随着培养基中葡萄糖本底浓度的增高而降低,两者之间呈负指数变化。同时利用14 C葡萄糖代谢测量方法,有效地检测出G6PD缺陷型A549细胞1-14C-葡萄糖释放的CO2放射性计数值低于A549细胞(P<0.01),以及线粒体DNA缺失型A549细胞6-14C-葡萄糖释放的CO2放射性计数值低于A549细胞(P<0.01)。2)A549/taxol细胞摄取6-14C-葡萄糖后释放的CO2放射性计数值(P<0.01)、18F-FDG的摄取率(P<0.001)和乳酸的生成量(P<0.01)均低于A549细胞。A549细胞经DCA处理后6-14C-葡萄糖释放的CO2放射性计数值升高(P<0.01),而A549/taxol细胞经DCA处理后6-14C-葡萄糖释放的CO2放射性计数值无变化。另外,DCA能够降低A549细胞和A549/taxol细胞葡萄糖的摄取率(P<0.001,P<0.01)、脂质的生成量(P<0.001,P<0.01)和乳酸的生成量(P<0.01,P<0.001)。 结论:1)本实验所建立的14C-葡萄糖代谢测量方法准确有效,能够有效地反应磷酸戊糖途径和线粒体氧化水平。2)A549/taxol细胞葡萄糖摄取和乳酸生成降低,同时有一定的线粒体氧化抑制。3)DCA能够促进A549细胞线粒体氧化磷酸化,而对其紫杉醇耐药株A549/taxol细胞的线粒体氧化作用不大。