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目的探讨转染小鼠肝癌H22细胞总RNA的树突状细胞激活的细胞因子诱导的杀伤细胞体外的抗瘤作用。方法(1)无菌取小鼠骨髓细胞,应用rmGM-CSF和rmIL-4体外刺激下增殖分化为DC,并对其进行鉴定。(2)无菌取小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞并在体外置于RPMI1640完全培养基培养。小鼠脾淋巴细胞培养2h后,收取非粘附细胞,加入rmIFN-g、anti-CD3、rmIL-2和rmIL-1b诱导成为CIK细胞。(4)体外常规提取H22细胞总RNA,经紫外分光光度仪测定0D260/0D280,计算总RNA含量和纯度,用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。(5)以H22细胞总RNA转染DC,将转染或未转染总RNA的DC分别和CIK细胞或脾淋巴细胞混合培养。(6)细胞毒性实验效应细胞分8组:转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞、未转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞、H22细胞总RNA激活的CIK细胞、CIK细胞、转染H22细胞总RNA的DC激活的脾淋巴细胞、未转染H22细胞总RNA的DC激活的脾淋巴细胞、H22细胞总RNA激活的脾淋巴细胞和脾淋巴细胞;靶细胞为H22细胞和S180细胞,效靶比为10:1,用MTT法测定各组效应细胞对靶细胞的杀伤活性。结果(1)从每只小鼠骨髓中提取的DC前体细胞和DC在体外经小鼠rmGM-CSF和rmIL-4培养和扩增7d后可获得约(2-3)×10~6个DC,显微镜下观察其具有较典型的DC形态;经用荧光抗体分析后可判定其为DC,纯度达70%以上。(2)所获得H22细胞总RNA的OD260/OD280＞1.90,H22细胞总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳图显示完整的28S和18S两条带。(3)每只小鼠脾脏获得(2-4)×10~7个脾淋巴细胞,在培养过程中细胞体积变化不大、增殖缓慢,培养至第13d大约扩增3倍。(4)CIK细胞在培养过程中,细胞体积由小变大,且呈明显多形性。CIK细胞能快速增殖,至第13d大约扩增35-50倍。(5)细胞毒性实验结果:①用不同方式激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤活性均高于其对应方式激活的脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性(P＜0.05)。②转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤活性高于其对S180细胞的杀伤活性(P＜0.05)。③转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤活性高于其他各组效应细胞对H22细胞的杀伤活性(P＜0.05)。结论(1)从小鼠骨髓中提取的DC前体细胞在体外能有效培养扩增,能满足本实验要求。(2)本实验所提取获得的H22细胞总RNA是完整的、纯度较高。(3)转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞具有高效而特异性的杀伤活性。本实验为探索防治HCC的新方法打下了坚实的基础。