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目的: 运用6-羟基多巴胺(6-OHDA)体外诱导PC12细胞建立PD细胞模型,观察α-硫辛酸(LA)对PD模型细胞的存活率、氧化应激水平、铁代谢及相关蛋白表达的影响,并进一步探讨其作用机制。 方法: PC12细胞接种于含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM高糖培养基中,置于含5% CO2、37℃的细胞培养箱中培养,生长24小时后的贴壁细胞用于后续实验研究。运用MTT法确定6-OHDA的最适造模浓度,筛选LA低、高保护浓度。实验随机分为正常对照组(无血清DMEM)、模型组(50μmol/L6-OHDA)、LA低剂量(0.001μmol/L LA预处理1h后+50μmol/L6-OHDA)组和LA高剂量(0.1μmol/LLA预处理1h后+50μmol/L6-OHDA)组。采用比色法测定各组细胞内MDA、铁含量;Western blot检测铁代谢相关蛋白DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2的表达情况;实时荧光定量PCR分析DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2的 mRNA水平。 结果: (1)与对照组相比,模型组细胞活力明显下降(P<0.01),细胞内MDA、铁含量显著增加(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白表达及mRNA水平均明显上调(P<0.01)。 (2)与模型组相比,LA低剂量组细胞活力上升(P<0.01),细胞内MDA、铁含量均显著减少(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白表达量均有所降低(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2的mRNA水平均明显下调(P<0.01)。 (3)与模型组相比,LA高剂量组细胞活力显著上升(P<0.01),细胞内MDA、铁含量均显著减少(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白表达量及mRNA水平均明显下调(P<0.01)。 (4)与LA低剂量组相比,LA高剂量组细胞内MDA、铁含量均有所减少(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1蛋白表达量均有所降低(P<0.01),DMT1(+IRE)、IRP1的mRNA水平均显著下调(P<0.01);而LA低剂量组与LA高剂量组相比,两组的IRP2蛋白及mRNA表达差异不具有统计学意义(P>0.05)。 结论: 6-OHDA诱导的PD模型细胞内含铁量增加,IRP1、IRP2、DMT1(+IRE)的mRNA水平及其蛋白表达量均明显升高,适合用于PD的铁代谢研究;而LA可下调PD模型细胞的IRP1、IRP2的mRNA水平,降低IRP1、IRP2蛋白表达量,抑制IRPs/IRE途径,下调DMT1(+IRE)的mRNA水平,降低DMT1(+IRE)蛋白表达量,减少细胞对铁的吸收,抑制铁聚积,最终对 PD模型细胞起保护作用,而抑制 IRPs/IRE通路推测可能与其抗氧化应激作用有关。