IFT-A复合物在鞭毛内运输与纤毛发生过程中的功能研究

来源 :清华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:songyingling
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纤毛也称为鞭毛,是基于细胞微管,由纤毛膜包裹的,突出于细胞表面的保守的细胞器。纤毛参与了细胞运动、信号传导等多种细胞过程,其结构或功能的异常会引发一系列的人类疾病,这些疾病统称为“纤毛相关性疾病”。鞭毛的组装、维持与解聚依赖于鞭毛内运输(intraflagellar transport,IFT)机制。IFT颗粒或者IFT蛋白由IFT-A和IFT-B两大复合物组成的。IFT蛋白参与调控鞭毛的各种功能,因此对IFT蛋白功能的研究至关重要。编码IFT-A的六个蛋白的基因突变都会导致骨骼畸形以及许多器官的异常。为了加深对IFT-A复合物蛋白在纤毛发生等过程中的功能研究,我们分析了在莱茵衣藻中通过RESDA-PCR方式确认的,未报道过的ift43缺失突变体以及其它的IFT-A蛋白缺陷突变体。通过对突变体的分析,我们发现IFT43蛋白的缺失或者其pfam序列区域的破坏都会导致细胞无法形成鞭毛,或只形成较短的鞭毛。完整的IFT43 pfam序列对IFT43的功能是必要且充分的。与其它IFT-A蛋白的突变体类似,ift43突变体的鞭毛中也积累IFT-B蛋白;但是,不同于IFT-A蛋白在其它IFTA突变体鞭毛中的减少,IFT-A蛋白在ift43突变体鞭毛中极大增加,甚至超过IFTB蛋白的增加量。通过对所有IFT-A突变体的综合研究,发现IFT-A蛋白复合物的体内稳态依赖于IFT-A复合物的完整性,IFT43蛋白还参与调控IFT-A蛋白的降解过程。为了进一步了解IFT-A蛋白的稳态变化,我们结合生化免疫共沉淀实验以及酵母双杂交的手段探明了IFT-A复合物的组织结构。通过免疫荧光的手段,我们发现IFT-A蛋白在鞭毛基体处的定位也依赖IFT-A复合物的完整性。此外,在有短鞭毛的ift140和IFT43 pfam序列截短的突变体的鞭毛再生与延长的实验中,我们发现IFT-A参与了鞭毛前体蛋白从细胞质库运输到鞭毛的过程。对野生型细胞使用胞质动力蛋白抑制剂的实验进一步验证了上述的发现,从而扩展了IFT-A除鞭毛内运输之外的功能。
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