His标签对AOX蛋白家族在抗条斑化的作用影响

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植物条斑化现象是指植物中绿色叶片中出现白色条斑的一种突变现象,叶片中的绿色部分含有正常叶绿体的细胞,但白色的组织细胞中却是缺乏叶绿素或类胡萝卜素的质体。条斑化现象会影响植物植株中干物质量的积累,造成产量下降。当此类现象出现在经济作物中时,将会造成较大的损失。在前期研究中,本课题组发现造成拟南芥条斑化的PTOX蛋白与其具有同源性的线粒体AOX蛋白有很多的相似性,当在AOX蛋白家族C端加上His标签后转入拟南芥条斑化突变体中时,条斑的化表型得到了回补。为了进一步探究AOX蛋白家族C末端His标签对抗条斑化功能的影响,本研究以拟南芥PTOX缺失的杂斑化突变体i mmutans(im)为材料,对已转化添加His标签的AOX蛋白所回补的植株进行叶绿素荧光分析,以获得其表型恢复后的光合效率。同时,构建了编码AOX蛋白家族成员的点突变及C端加His标签的基因表达载体,并利用农杆菌介导的遗传转化体系获得了相关转基因拟南芥植株,观察了植株的表型并分析了His标签对AOX蛋白功能的影响。本研究为进一步揭示AOX家族蛋白的功能及其在植物抗条斑化中的应用提供了相关理论参考依据。主要研究结果如下:(1)以本实验室前期获得过表达AOX1b-His和AOX2-His的拟南芥im突变体为材料,对植株的光合效率进行了测定,发现AOX1b和AOX2蛋白C端添加His标签之后能够使突变体植株光合速率恢复至正常水平;(2)构建了AOX蛋白家族5个成员(AOX1a、AOX1b、AOX1c、AOX1d和AOX2)和PTOX蛋白点突变的表达载体,以及点突变后C端加His标签的表达载体,通过农杆菌介导的拟南芥遗传转化体系,转化到拟南芥中,通过PCR鉴定和蛋白质分析获得了T1代转基因株系;(3)对拟南芥点突变转基因植株的表型进行观察,发现了活性位点被突变后的AOX蛋白家族成员均不能回补im植株的条斑化表型;(4)在活性位点被点突变后的AOX蛋白C端加上His标签,转至拟南芥im条斑化突变体,条斑化突变体的表型仍然无法被回补。表明His标签不能弥补AOX活性位点缺失对植物条斑化的影响。
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