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细胞分裂素(cytokinins;CKs)是一种重要的植物激素,调节植物的生长和发育过程。细胞分裂素的生理作用和代谢被广泛研究,它由细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase;CKX)不可逆地降解。CKX在调节植物体内源的细胞分裂素动态平衡方面起着十分重要的作用,特别是在阐明细胞分裂素对植物生长发育、形态建成方面的功能作用。本论文通过对AtKX1基因表达的特异性调控,研究该基因对转基因烟草生长发育及其抗逆性的影响。主要结果如下:
1、构建了pUbiquitinI::AtCKX1、pTobRB7::AtCKX1和pRD29B::AtCKX1表达载体。
2、通过根癌农杆菌介导法获得Ubiquitin1::AtCKY1、TobRB7::AtCKX1和RD29B::AtCKX1烟草植株,每个载体分别获得20个不同转化株系。转化系经PCR、Southem杂交证明外源基因AtCKX1基因已整合到烟草基因组;RT-PCR结果证明AtCKX1基因分别在Ubiquitin1::AtCKX1株系(U3和U7)呈组成型表达,在TobRB7::AtCKX1株系(T1)呈根特异性表达,在RD29B::AtCKX1株系(R1和R4)中、受盐或甘露醇处理诱导或是在自然干旱条件下表达。
3、U3、U7、T1、T3株系具有比野生型(WT)发达的根系,R1和R4株系在盐或甘露醇处理或是自然干旱条件下也具有发达的根系。
4、U3、U7、Tl、T3、R1、R4的烟草植株株高略低于WT植株,而转基因株与WT的叶片数(均为22片)或是叶片面积均没有差别。
5、U3、U7、T1、T3的开花时间略迟于WT,但R1和R4烟草植株开花时间则略早于WT。
6、U3、U7、T1、T3、Rl和R4每株的蒴果数与WT相同,但其种子干重均明显高于WT。
7、U3、U7、T1、T3、R1和R4的耐旱性均比WT强,同时,R1和R4的耐盐或渗透的能力也比WT强。
综上,本论文实验表明载体pUbiquitin1::AtCKX1、pTobRB7::AtCKX1、pRD29B::AtCKX1均可用于培育发达根系的转基因株、培育高耐逆性的植株,且对其它重要的农艺性状如蒴果数、种子重量、叶片数、叶片大小、株高等均无不良的影响。