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诱导多能干细胞是当今的研究热点之一,该项技术在生物医学、细胞工程、组织工程和转基因动物生产等领域具有广泛的应用前景。本研究在克隆获得Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc基因的基础上,构建逆转录病毒载体pMXs-Sox2、pMXs-Oct4、pMXs-Klf4和pMXs-cMyc并获得病毒悬液。将获得的病毒悬液感染小鼠成纤维细胞后,观察其形成细胞克隆的能力及检测细胞克隆的碱性磷酸酶活性,为进一步开展小鼠iPS的相关研究奠定基础。本研究的研究结果如下。(1)利用小鼠肝组织DNA扩增获得经PCR和酶切鉴定约在1000bp处出现特异条带的Sox2基因；利用小鼠囊胚RNA扩增获得经PCR和酶切鉴定约在1400bp处出现特异条带的Oct4基因；利用小鼠孕期19.5d皮肤组织RNA扩增获得经PCR和酶切鉴定约在1500bp处出现特异条带的Klf4基因；利用小鼠乳腺癌细胞RNA扩增获得经PCR和酶切鉴定约在1400bp处出现特异条带的c-Myc基因。对所获得的Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc基因进行序列分析,其与GenBank中相应序列的同源性分别为100%、99.91%、99.72%和100%。(2)利用克隆获得的Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc基因,与逆转录病毒载体pMXs构建获得经PCR、酶切和测序鉴定正确的逆转录病毒载体pMXs-Sox2、pMXs-Oct4、pMXs-Klf4和pMXs-cMyc。(3) Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc诱导因子的病毒悬液通过细胞免疫荧光检测其具有感染能力；将其感染小鼠成纤维细胞,经常规方法传代后第3d可见到ES样克隆出现,第7d进行挑克隆传代3次后诱导细胞具有典型的小鼠ES细胞克隆形态,并且碱性磷酸酶活性检测呈现阳性的蓝紫色。综上所述,本研究运用成功克隆获得的Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc基因与逆转录病毒载体pMXs构建相应逆转录病毒pMXs-Sox2、pMXs-Oct4、pMXs-Klf4和pMXs-cMyc,利用其诱导小鼠成纤维细胞获得与小鼠ES细胞在形态学及生物学特征中极为相似的细胞克隆,为进一步探讨哺乳动物iPS的相关研究奠定基础。