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阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)亦称老年性痴呆病,是一种以进行性记忆缺失和痴呆为特点的大脑退行性疾病,其脑组织特征性病理变化主要有:老年斑(NP),淀粉样血管病变(AAP)、神经元丢失、神经元内纤维缠结(NFT)、大脑皮质神经细胞功能丧失及死亡。
复方二精灵由枸杞子和黄精组成,枸杞子是一味传统中药,为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实。宁夏枸杞的化学成分主要含枸杞多糖、甜菜碱、类胡萝卜素及类胡萝卜素酯、维生素C、氨基酸及微量元素等成分。枸杞多糖为其主要活性成分之一,具有免疫调节,抗疲劳、抗衰老,降糖明目,保肝降脂及抗肿瘤等作用。黄精是百合科(Liliaceae)黄精属(Ploygonatum)多种植物的干燥根茎,含有黄精多糖、皂苷、烟酸、醌类、氨基酸及微量元素等成分。黄精多糖是黄精生物学活性物质的一个重要的成分,具有免疫激发、延缓衰老、增强免疫、抗病毒等多种药理作用。
本论文主要进行了以下两方面的研究:
1.以枸杞、黄精、二精灵为材料,采用水提醇沉、DEAE-纤维素、Sephadex G 200、CM Sephadex C50 柱层析等系列方法对其多糖进行了分离纯化,并研究了黄精多糖的结构组成。枸杞多糖经DEAE-纤维素柱层析得五个组分(与文献相符)。黄精多糖得到三个组分,组分I 由50个葡萄糖单元组成,相对分子质量为8100,以a-(1? 4)糖苷键链接,且6-O 上连有少量短的支链;组分Ⅱ、Ⅲ 主要由阿拉伯糖和葡萄糖及糖衍生物组成,并含有糖醛酸。二精灵粗多糖经DEAE-纤维素柱,依次用200ml H2O、0.05、0.10、0.15、0.25、0.50mol·L-1NaCl、0.1 mol/L NaOH 洗脱,得六个组分,此六个组分分别用Sephadex G 200 层析,均未分开。
2.用SD雄性大鼠以脑内海马区注射A?1-40制作AD动物模型,然后随机分成正常组、损伤对照组、AD模型组、二精灵治疗组。以morris水迷宫法和紫外分光光度法检测大鼠的学习记忆行为与脑组织的SOD、GSH-PX、Na+-K+-ATP酶、CHE、T-OAC、NOS活性及NO、MDA的含量。HE染色观察海马区神经元细胞的变化,免疫组化观察大鼠海马?-淀粉蛋白、NOS2的表达情况。结果显示,用注射A?1-40建立的AD模型大鼠学习记忆能力明显低于正常组、给药组,二精灵多糖能显著地提高模型大鼠的学习记忆和空间认知能力。AD模型组大鼠脑组织SOD、GSH-PX、Na+-K+-ATP酶、CHE、T-OAC等活性降低,NO、MDA含量升高,给药后状况得到改善,表明二精灵多糖具有清除自由基的能力,通过抗氧化作用达到提高AD大鼠学习记忆能力。从病理学观察到二精灵组及正常组大鼠海马神经元细胞均以淡染细胞为主,有极少的深染细胞,核仁清楚可见,而AD模型组大鼠海马神经元细胞以深染为主,呈带状,未见核仁,这可能是细胞凋亡或萎缩引起的,说明二精灵多糖通过清除自由基达到减轻细胞的损伤。免疫组化结果显示,A?1-40和NOS2在模型组大鼠脑组织为强阳性表达,在给药组表达弱于模型组,正常组及对照组表达很弱,表明二精灵多糖可减少A?的表达与堆积,抑制NOS2的表达,从而达到抗老年痴呆的作用。