【摘 要】
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本文旨在构建携带有抗癌基因11R-P53和mGM-CSF基因的腺病毒载体,并检测目的基因在体内、体外肿瘤细中的表达情况来验证其潜在的抗肿瘤效应；通过比较其与腺病毒SG7605-11R-P53
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本文旨在构建携带有抗癌基因11R-P53和mGM-CSF基因的腺病毒载体,并检测目的基因在体内、体外肿瘤细中的表达情况来验证其潜在的抗肿瘤效应；通过比较其与腺病毒SG7605-11R-P53和SG7605-mGM-CSF治疗小鼠肝癌模型后瘤体增长情况的对比,来对我们的基因病毒治疗系统SG655-mGMP的靶向性、有效性和安全性作以评价。目的：构建携带11R-P53和mGM-CSF基因的病毒质粒并检测其在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤的抑制作用。方法：利用酶切法重组目的基因并整合到腺病毒E1B-55KD区,测序正确后包装并大量制备病毒质粒,并命名为SG655-mGMP。采用50%组织培养感染剂量(TCID50)法测定病毒滴度。用MOI=5的腺病毒SG655-mGMP体外转染BJ细胞、Hep3B细胞、Huh7细胞及Hepal-6细胞并用western blot法测定细胞培养液中目的基因的表达情况；在体内,用处于对数生长期的Hepal-6细胞按每只5×106的细胞量接种于40只C57BL/6小鼠皮下,成瘤10mm左右时将小鼠随机分为A、B、C、D四组,分别瘤内多点注射SG655-mGMP、 SG7605-11R-P53、SG7605-mGM-CSF和生理盐水。用免疫组织化学染色的方法检测各组小鼠肿瘤组织中P53基因和mGM-CSF基因表达情况并测量小鼠肿瘤生长状况,并测量各组小鼠肿瘤在治疗后肿瘤生长状况。结果：成功构建SG655-mGMP,测其滴度为7.3×109PFU/ml;目的基因可在体外细胞及小鼠肝癌模型中表达并且能明显抑制肿瘤的生长。
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