枯草芽孢杆菌是一种公认的对环境安全的革兰氏阳性细菌,同时具有非致病性、较容易培养、繁殖速度较快和遗传背景清楚及分泌蛋白能力强的特性,而且作为基因工程菌的出发菌具有巨大潜力和优势,广泛应用到各个领域。本研究为了减少胞外蛋白酶对外源蛋白的降解,使用的表达菌株是突变了 8个关键胞外蛋白酶的枯草芽孢杆菌WB800菌株,并利用同源重组的原理将信号肽库整合到枯草芽孢杆菌穿梭表达载体pBE-S上。将处理过的半夏cDNA与带有信号肽库的表达载体pBE-S随机融合,从而构建半夏cDNA文库,共获得1772个单克隆转化子。枯草芽孢杆菌WB800噬菌体分离与鉴定对抗噬菌体基因的筛选至关重要。本研究成功分离一株枯草芽孢杆菌噬菌体,电镜观察WB800噬菌体粒子是头为六面体,大约43nmX33nm,短尾,尾部大约为40nm。提取噬菌体DNA进行鉴定,测序结果显示为枯草芽孢杆菌噬菌体Nf。之后从半夏cDNA文库中筛选抗噬菌体基因,探索了抗噬菌体基因筛选的方法。本研究在筛选抗菌基因时,发现一些转化子出现自溶现象,利用这种方法,从半夏cDNA文库中获得了 42个自溶现象明显的转化子,将42个转化子进行测序和分析。BLAST 比对发现,所有序列在NCBI数据库中没有发现相似序列。在42个转化子中挑选15个自溶菌株提取质粒后进行重新转化,确定自溶现象稳定性,有12个菌株经过重新转化后自溶现象再次出现。并对1168菌株进行深入研究,多次提取的粗蛋白均对枯草芽孢杆菌自身有明显抑菌效果,同时对1168菌株粗蛋白进行Tricine-SDS-PAGE,电泳结果显示大约在8kD左右有条带,与蛋白预测大小吻合。本研究探索出一种筛选抗菌基因的有效方法,为后续的研究作好了前期准备。