论文部分内容阅读
目的本实验旨在通过测定补阳还五汤复方颗粒中黄芪、川芎、赤芍、桃仁、的含量,实现复方颗粒的质量控制,为临床推广应用以及工业化大生产奠定理论基础。通过急性毒性试验初步评价补阳还五汤复方颗粒的安全性,以期提供科学可靠的研究资料。方法1补阳还五汤复方颗粒的制备在课题组前期研究的基础上,依据方中各味药的理化性质确定有效部位的提取条件,包括提取溶剂及其浓度、提取时间等,精制分离并干燥提取物,根据中医药基础理论的君、臣、使配伍原则以及原方比例重新组合,添加相应辅料,混匀后再次干燥即得补阳还五汤复方颗粒。2采用蒸发光散射检测器(ELSD)对补阳还五汤中君药黄芪的黄芪甲苷进行HPLC含量测定,色谱柱:Agilent EC C18(4.6*150mm,4μm),流动相:乙腈-水(38:62),流速:0.8ml/min,ELSD检测器条件:漂移管温度为80 ℃,雾化气(空气)流速为1.6 L/min,增益值:1。3采用紫外分光光度法测定川芎饮片中川芎嗪含量,以川芎嗪含量为评价指标,在254nm处测定川芎嗪的吸光度。4采用紫外检测器(UV)对赤芍提取物中的芍药苷进行HPLC含量测定,色谱柱:Hypersil C18(4.6*250mm,4μm),流动相:乙腈-水(16:84),流速:1.0 ml/min。5采用蒸发光散射检测器(ELSD)对桃仁提取物中的甘油三亚油酸酯进行HPLC含量测定,色谱柱:Thermo Accucore XL C18(4.6*250mm,4μm),流动相:乙腈-二氯甲烷-四氢呋喃=(52:32:16),流速:1.0 ml/min,ELSD检测器条件:漂移管温度为70 ℃,雾化气(空气)流速为1.5L/min,增益值:1。6取健康昆明小鼠60只,按体重和性别随机分为补阳还五汤复方颗粒(1.574g/ml的混悬液,按最大浓度配制)和空白对照组,每组30只,雌雄各半。正式实验开始前只禁食不禁水,12小时后,每只给药组小鼠按40 mL/kg体重灌胃,每天给药一次,同时仔细观察各小鼠的活动、进食、饮水及毒性反应等情况。观察期7天结束后,处死并解剖每组存活的小鼠,肉眼观察上述主要脏器大致病理变化,并记录脏器重量,计算脏器指数。结果1含量测定黄芪甲苷在0.20～3.94μg范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为102.76%(RSD1.51%);川芎嗪在10～50μg范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为100.45%(1.48%);芍药苷在0.32～4.00μg范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为99.97%(RSD1.55%);甘油三亚油酸酯在0.18～3.63 μ g范围内呈现良好的线性关系平均加样回收率为99.92%(RSD1.74%)。2急性毒性试验在为期7天的观察中,两组小鼠均无出现死亡的情况,小鼠的外观、进食、行为活动、排便等未见异常,体质量增加正常,脏器指数正常,补阳还五汤复方颗粒组与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论补阳还五汤复方颗粒中黄芪甲苷的含量为13.73mg/g;川芎提取物中川芎嗪的含量为0.1045mg/g;赤芍提取物中芍药苷的含量为20.25mg/g;桃仁提取物中甘油三亚油酸酯的含量为1.26mg/g。补阳还五汤复方颗粒成人日剂量为0.0735g/kg,本实验中测得其最大给药量为63.28g/kg,为临床人用剂量的861倍,所有小鼠均无出现死亡,无异常急性毒性反应,小鼠体质量在试验观察期内正常增加,解剖学检查未见气质性病理变化的器官,表明补阳还五汤复方颗粒未见有明显的急性毒性作用,临床应用较为安全。