岩高兰多酚的提取纯化、成分鉴定及其生物活性研究

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本研究以岩高兰(Empetrum nigrum)为研究对象,采用复合酶辅助超声波法提取其地上部分(茎和叶)中的多酚类成分,并通过大孔吸附树脂法对岩高兰多酚粗提物进行富集纯化,同时结合LC-MS/MS技术鉴定岩高兰多酚类化合物的具体结构,并对粗提物和纯化物分别进行抗氧化和抗菌活性的评价。本论文开发出了高效、绿色、经济的岩高兰多酚提取富集工艺,为合理开发和利用岩高兰资源提供了理论支持和科学参考。具体研究结果如下:1.采用复合酶辅助超声波提取技术,对岩高兰地上部分的多酚进行提取。在单因素试验和部分因子设计试验的基础上,通过响应面法分析得到最佳提取工艺条件为:温度为38.39℃、培养时间为3.39 h、单宁酶添加量为386.53 U/g、纤维素酶添加量为224.42 U/g。此时,岩高兰多酚的提取率可达52.31 mg/g。2.通过大孔吸附树脂法对粗提物多酚进行纯化。通过考察后确定以HPD-600型大孔树脂为实验树脂。通过响应面法分析得到最佳工艺为:上样浓度0.84 mg/mL;乙醇浓度62.15%;洗脱流速0.67 mL/min;洗脱体积2.71 BV。此条件下,岩高兰多酚提取率为229.18 mg/g,纯度由8.1 1%提高到22.56%,回收率为67.78%。3.采用LC-MS/MS技术对岩高兰地上部分的多酚类化合物结构进行分析鉴定,确定岩高兰中含有10种多酚类化合物:新绿原酸、儿茶素、芦丁、金丝桃苷、番石榴苷、槲皮素、4’-甲氧基-2’-羟基二氢查耳酮、2’,4’-二羟基二氢查尔酮、7-羟基二氢黄酮、2,4-二羟基-2’-甲氧基-3’,4’-二甲基查耳酮。4.以Vc为阳性对照,对粗提物与纯化物的抗氧化能力进行测定。抗氧化能力IC50值在DPPH自由基清除能力试验中,分别为212.919和165.435μg/mL;在ABTS自由基清除能力试验中,分别为182.242和43.555μg/mL;在铁离子还原能力(FRAP)试验中,当浓度为500μg/mL时,其测定值分别为3.272和4.671 mmol/L。结果表明岩高兰多酚的粗提物和纯化物均具有较强的抗氧化活性,且纯化物的抗氧化活性要优于粗提物。采用琼脂孔扩散法以3株革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌)和3株革兰氏阴性菌(大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌)为供试菌,对提取物的抗菌活性进行了评价。结果表明岩高兰多酚的粗提物与纯化物均具有良好的抗菌效果,且纯化物的抗菌效果更强;此外,提取物对革兰氏阳性菌的抗菌效果更优。综上所述,本研究开发出一套岩高兰多酚提取的新工艺,并利用大孔吸附树脂法获得了纯化工艺;鉴定了岩高兰中的10种多酚类化合物;确定了岩高兰多酚提取物均具有良好的生物活性。本论文对岩高兰有效成分高效提取和富集具有重要的理论参考价值,同时为其合理开发利用其提供了必要的科学支撑。
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