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本研究从IFI204-/-（干扰素活化基因204缺失）小鼠的粪便中分离得到嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila,AKK）,探讨其在预防小鼠和比格犬肥胖中的作用,并研制嗜黏蛋白阿克曼菌微胶囊,为其应用奠定基础。本实验室前期发现IFI204-/-小鼠肠道中嗜黏蛋白阿克曼菌丰度远高于野生型对照小鼠,结合PCR鉴定,本试验从IFI204-/-小鼠粪便中分离出2株嗜黏蛋白阿克曼菌（编号为AKK1、AKK2）。基于16S rRNA序列构建了系统发育树,在NCBI中BLAST比对结果显示AKK1和AKK2分离株与GenBank中已收录的Akkermansia muciniphila处于同一分支,是嗜黏蛋白阿克曼菌。随后,对其进行了生物学基本特性分析,包括生长曲线和稳定性分析。发现其对数期在72 h左右,且AKK2的峰值略高,达到1.6×108 CFU/mL;耐受性检测表明,AKK2的耐酸性强于AKK1;后续实验选取对数期活菌数高,更耐酸的AKK2作为供试菌株。最近的研究表明,70℃30 min巴氏灭活处理的嗜黏蛋白阿克曼菌在抑制小鼠糖尿病模型中比摄入活菌效果更佳。本试验通过高膳食诱导小鼠肥胖,应用巴氏灭活的AKK2进行干预,检测小鼠血清中的相关指标,发现其具有减缓高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重增加,提高机体血糖控制能力的效果,与其他嗜黏蛋白阿克曼菌研究结果一致。并进一步观察到AKK2能通过抑制脂肪积累,降低血脂,使小鼠各项生理指标趋于正常,进而达到改善高饮食诱导的小鼠肥胖的目的。小鼠肝脏病理组织学分析显示AKK2减轻小鼠肝重,抑制肝脏脂质积累,保护高脂膳食导致的肝损伤。综上所述,AKK2通过抑制脂肪合成和增强能量代谢,改善非酒精性脂肪肝等相关代谢综合征,抑制小鼠肥胖。小鼠肥胖模型的成功建立为探究AKK2在比格犬肥胖中的调节作用奠定了基础。在高膳食诱导比格犬肥胖的过程中,HFD（高脂饮食灌胃PBS）组的BCS（Body Condition Scoring）与体重在9周内显著增加,血脂水平升高,成功建立了比格犬肥胖模型。OGTT（糖耐量试验）检测发现AKK2干预的HFD+AKK组（高脂饮食灌胃AKK）血糖降低。通过对犬TG（甘油三酯）、TC（总胆固醇）、LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇）及HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇）的检测发现,AKK2明显改善肥胖犬的血清四项指标。肝功能检测表明,AKK2抑制高脂饮食造成的肝损伤,与在小鼠肥胖中的作用一致。同时HFD+AKK组犬相关指标均处于正常范围内,说明短期口服AKK2对比格犬健康没有造成不良的影响。嗜黏蛋白阿克曼菌存在于多种哺乳动物肠道,但未见犬肠道内嗜黏蛋白阿克曼菌的报道。给菌AKK2后,通过荧光定量PCR在HFD+AKK组5个粪便样品中的4个检测到嗜黏蛋白阿克曼菌存在,说明AKK2在比格犬的肠道中能够有效通过并被识别。肠道菌群在调节多种生理、病理活动中发挥重要作用,也是影响肥胖的重要介质。因此,为分析AKK2是否影响肠道菌群,我们通过16S rRNA基因测序分析ND组（普通饮食灌胃PBS）、HFD组（高脂饮食灌胃PBS）、HFD+AKK组（高脂饮食灌胃AKK2）的肠道菌群组成结构。结果显示各组间犬的粪便微生物群落具有显著差异。在门水平上,HFD组中厚壁菌门比例减少,而拟杆菌门、变形菌门、放线菌门比例增加。在属水平上,高脂饮食导致HFD组的双歧杆菌属和乳酸菌属比例降低。经AKK2干预后,HFD+AKK组犬肠道中厚壁菌门比例回升,双歧杆菌属比例增加,乳酸菌属比例也趋于正常水平。因此,我们推测嗜黏蛋白阿克曼菌可以通过促进益生菌的生长进而调控高脂饮食造成的肠道菌群失衡。这些发现有助于利用益生菌或其他营养干预方法调节肠道微生物组,并为犬肥胖或其他代谢性疾病提供替代疗法。由于试验前未检测到犬肠道内嗜黏蛋白阿克曼的存在,口服活菌后难以维持长时间定植,为提高其应用潜力,试制嗜黏蛋白阿克曼菌微胶囊,使其免受胃酸及胆汁酸的侵害,提高细菌到达肠道后的活菌数。以海藻酸钠、果胶、壳聚糖为壁材,将嗜黏蛋白阿克曼菌进行包埋,制备的微胶囊外形完整,包埋率达到81.8%。胃肠道稳定性体外模拟试验表明,微胶囊显著提高了细菌存活率。4℃贮存4周后微胶囊中活菌数达到1.57×107 CFU/g,高于国际乳品联盟关于微生态制剂最低销售标准活菌数107 CFU/g。因此,嗜黏蛋白阿克曼菌微胶囊是保障嗜黏蛋白阿克曼菌应用效率的重要方式。