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抗菌肽(AntibacterialPeptide)又被称之为抗微生肽,是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分,广泛的分布于细菌及各种动植物体内。抗菌肽是一类不仅具有广谱抗菌作用,还具有杀死一些真菌、病毒、肿瘤细胞和实体瘤等作用的小肽类物质。为了研究抗菌肽的抗肿瘤活性,本文利用已经构建的抗菌肽真核表达载体pVAX1-ABPS1进行人工荷瘤裸鼠的基因治疗研究,以确证其体内抗肿瘤的效应和毒副作用,为进一步研究新型抗肿瘤药物奠定基础。
本实验分别在疗效、治疗剂量及对人脑胶质瘤(U251)与人子宫颈癌瘤(HeLa)的治疗效果的比较三个方面进行了研究。
首先进行疗效实验,在成功建立了U251荷瘤裸鼠模型后,随机分为3组,每组5只,分别为治疗组、空载体组和对照组。治疗组和空载体组每只小鼠每天瘤内注射10μg重组质粒pVAX1-ABPS1和10μg空载体pVAX1,连注7天。对照组每天注射等量PBS,隔日观察裸鼠肿瘤的大小变化及生存状态。结果表明,实验组的瘤重明显小于对照组(p<0.05)。取肿瘤组织、肝脏、肺脏等器官进行病理学观察,发现实验组肿瘤组织的细胞间隙增大,结合不紧密,不同程度的点状、片状坏死。而肝脏、肺脏等组织器官无明显病理损伤。提取肿瘤组织总RNA,进行RT-PCR检测,实验组出现了特异性247bp的ABPS1基因片段,表明ABP在肿瘤组织中进行了表达。
随后进行最佳治疗剂量实验,以HeLa荷瘤裸鼠为模型,实验分5组,每组5只,分别为对照组和1μg、5μg、10μg、15μg剂量组,实验组每只小鼠每天瘤内注射一定剂量的重组质粒pVAX1-ABPS1,连注7天。结果表明,瘤内注射15μg重组质粒组与对照组相比,瘤重差异显著(p<0.05)。
另外,本文还对U251与HeLa两种人工荷瘤裸鼠的治疗效果进行了比较,共分4组,每组5只。实验组每只小鼠每天瘤内注射重组质粒pVAX1-ABPS115μg,连注7天。结果表明,该载体对人脑胶质瘤的抑瘤率为36%,对人子宫颈癌瘤的抑瘤率为38%。上述结果均表明,将抗菌肽表达载体导入人工荷瘤小鼠的瘤体内,可以起到比较明显的抑瘤作用。这将为进一步进行基因工程抗菌肽的抗肿瘤机理等方面的深入研究,并进而研制成新型抗肿瘤基因治疗药物奠定基础。