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烟草是一种重要的经济作物。烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus,TMV）侵染引起的烟草花叶病在我国发生极为普遍，严重影响了烟草的产量和质量。有效防治TMV的方法是培育抗病品种。因此，探究抗性基因N与TMV的相互作用诱导过敏性反应（Hypersensitiveresponse,HR）的影响因素，以及对其中的抗性基因进行克隆和功能鉴定具有重要意义。本实验以烟草品种Nicotianatabacumcv.Xanthi为材料，研究其在TMV感染下HR诱导的时间性和温度敏感性，以及不同浓度TMV接种对HR诱导和枯斑形成的影响，同时克隆TMV抗性基因N的同源基因，并对其主要功能区域进行分析。从而为进一步理解植物的抗病机理和烟草抗病毒品种的选育提供理论依据。主要研究成果如下：1.通过观察TMV感染含N基因烟草（N.tabacumcv.XanthiNN）与不含N基因烟草（N.tabacumcv.Xanthinn）的症状表现，结果显示，不含N基因的烟草Xanthinn在TMV感染后叶片侧脉及支脉组织呈半透明状，叶片薄厚不匀，呈花叶症状。含N基因的烟草XanthiNN在TMV感染后出现明显的HR，形成枯斑，获得抗性。2.通过对TMV感染后HR的出现进行了监测。结果表明，TMV接种后36h在感染部位开始出现HR，48hHR症状明显，随着时间的推移，斑点内的细胞逐渐死亡，形成枯斑。TMV接种一段时间后，在22℃或28℃时，烟草叶片出现典型的HR，而在15℃或35℃时，叶片上不出现HR。这些结果说明HR的诱导具有时间性和温度敏感性。3.不同浓度TMV感染对HR的诱导进行了调查，结果显示，用不同浓度TMV提取液接种，无论TMV提取液浓度的大小，在22℃时，都是在接种36h后出现HR。而在28℃时，都是在接种48h后出现HR。这与前面的结果一致，说明TMV浓度对HR的诱导影响不明显。4.不同浓度TMV感染对枯斑形成的大小及密度进行了研究，结果显示，用不同浓度TMV提取液接种，无论在22℃或28℃下，都对枯斑的大小有一定的影响，高浓度导致枯斑增大，低浓度下枯斑大小变化不大，而且枯斑密度也与浓度呈一定的相关性。5.根据已知的烟草N基因设计特异性引物，通过RT-PCR获得N基因同源基因的cDNA片段（命名为NH1）。序列分析显示NH1cDNA含2040bp核苷酸，编码679个氨基酸。序列同源性比较发现，NH1与其它N同源基因具有较高的同源性。结构分析证明NH1具有P-loop、Kinase-2、Kinase3a、疏水结构域（HD）和3个典型的亮氨酸重复结构域（LRR），属于NBS-LRR类抗性蛋白。6.选取在22℃时TMV感染后0h、12h、24h、36h、48h、60h、72h的烟草叶片为材料，提取RNA，通过半定量RT-PCR检测NH1在不同时刻的表达差异。结果显示，TMV感染后0h、12h、24h、36h、48h，NH1基因的表达显著，而TMV感染后60h、72h，NH1基因表达略有下降。这表明NH1基因的表达不受TMV接种的诱导，而枯斑的形成和叶片的坏死可能影响NH1基因的表达。