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子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是妇科常见良性疾病,临床主要表现为痛经、不孕、性交痛等,严重影响着妇女的健康和生活。EMs的发病原因存在经血逆流、体腔上皮化生、免疫学说等多种学说,但至今病因不明确。随着干细胞相关研究的不断深入,越来越多的研究证明子宫内膜内存在着干/祖细胞,这些干/祖细胞介导着子宫内膜的周期性再生。因此有学者提出了EMs的干细胞起源学说,认为异位病灶中的终末细胞不能维持病灶的长期发展,而干/祖细胞的分化增殖可能导致EMs的发生。本课题组已经证实了骨髓来源干细胞可以在在位子宫内膜向腺上皮方向分化,本研究建立了接受雄性GFP转基因小鼠骨髓细胞移植的子宫内膜异位症小鼠动物模型,予以补充雌激素,通过检测异位内膜组织中GFP来源的细胞是否表达子宫内膜腺上皮细胞标记,进一步探讨雄鼠来源骨髓干细胞能否在异位内膜中向子宫内膜方向进行分化以及雌激素在这一过程中的作用。本研究为EMs病因研究的干细胞学说寻求进一步的实验依据,进而为EMs的临床诊疗研究提供新的方向。材料与方法:1.小鼠子宫内膜异位症模型的建立:供体鼠和受体鼠均采用8周龄雌性野生型C57BL/6J小鼠,经腹腔注射法复制小鼠同系异体子宫内膜异位症模型。牺牲供体小鼠,取子宫,经腹腔注射将子宫组织碎片移植到受体小鼠腹腔内。2.GFP雄性小鼠骨髓细胞移植:供体鼠为4周龄转GFP基因雄性C57BL/6J小鼠;受鼠为已建立子宫内膜异位症模型的受体鼠。使用Sr-137不同剂量全身照射受体小鼠(OcGy/半致死剂量65OcGy/致死剂量85OcGy)后,使用4周龄转GFP基因雄性C57BL/6J小鼠行同种异体骨髓移植,牺牲供体鼠,取股骨和胫骨冲出骨髓腔内容物制备骨髓细胞悬液,进行细胞计数,经尾静脉注射进行骨髓移植。3.补充雌激素:试验组每周肌肉注射17β-雌二醇油溶液;对照组每周肌肉注射溶剂油。4.于造模2-3月后处死小鼠并开腹,观察异位病灶形成情况。镜下取异位内膜行病理形态学、免疫荧光、小动物整体成像等方法检测。结果:1.造模2-3月后处死小鼠可见异位种植的子宫内膜均存活,于肠管间、子宫旁、腹壁下、肝小叶下或脾周形成囊泡状、团块状或星点状内膜异位病灶,并可见肠管间、内异灶与腹壁、脾周形成的粘连带。组织形态学检测可见典型的异位子宫内膜腺体及间质,提示复制动物模型成功。2.补充雌激素组小鼠子宫肥大明显,未补充雌激素组子宫大小与正常小鼠无差异。照射组小鼠子宫严重萎缩,形成子宫内膜异位症病灶较未照射组小。3.小动物整体荧光成像见骨髓移植后内膜异位症病灶存在着GFP骨髓来源细胞的富集。补充雌激素组GFP阳性细胞较未补充雌激素组显著增多。4.取异位组织进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察发现在异位病灶中存在GFP和角蛋白双阳性的细胞。结论:1.子宫内膜异位病灶区域有骨髓来源干细胞的富集现象。雌激素可能促进了该富集过程。2.雄鼠骨髓来源的干细胞可以长期定植于子宫内膜异位症病灶,并向腺上皮方向进行分化。