论文部分内容阅读
本研究以VP4和VP7为目的基因,设计具有BamH Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点及Kozak序列的VP4基因引物,采用套叠PCR对VP4进行定点突变,构建了pBI121-VP4植物表达载体;同时设计具有BamH Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点及Kozak序列的VP7基因引物,构建了pBin438-VP7植物表达载体。利用农杆菌介导法,转化烟草叶盘,经卡那霉素(Kan)多重筛选,获得抗性植株。对抗性植株提取DNA进行PCR分析,40-50﹪抗性植株呈阳性。选取几株生长良好的PCR检测为阳性的转基因烟草植株提取总DNA经HindⅢ内切酶消化后进行Southen-blot分析,结果表明所有待检样品均出现较强的特异杂交信号,对Southern-blot检测为阳性的植株,提取总蛋白进行Western-blot分析,证明部分植株表达了轮状病毒VP4和VP7。