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本实验对来自山西忻州的一些表现病毒病症状的白草、高粱和玉米材料(共15个样品)采用生物学,血清学和分子生物学等方法和技术进行了检测和序列的分析、比对。 利用多种植物病毒的抗血清对全部标样进行ELISA检测,结果表明15个样品都与白草花叶病毒的抗血清反应。其中10号样品既与白草花叶病毒(PenMV)的抗血清反应,还与甘蔗花叶病毒北京分离物(SCMV -BJ)的抗血清呈阳性反应。使用SCMV-BJ特异性的引物从10号样品中扩增出约700bp的片段。包括3′-NTR和CP基因的C末端。所得的核苷酸序列与SCMV-BJ的同源性达到99.28%。所得CP的C末端其氨基酸序列与SCMV-BJ的同源性达100%。结合血清学结果,得出结论:10号样品中同时含有两种病毒,属于混合侵染。 利用白草花叶病毒特异性引物扩增这15个分离物的外壳蛋白基因序列。序列分析表明,15个样品的外壳蛋白基因均为909个核苷酸(含终止密码子),编码302个氨基酸。这15个样品再加上已知的PenMV-A,PenMV-B,PenMV-C三个分离物两两比对的核苷酸序列同源性在91.1%-100%,其中1号,4号,10号,15号的同源性为100%,11号和13号同源性也为100%,;氨基酸序列同源性在97.7%～100%。15个分离物均含有PenMV。 通过比对这15个样品的外壳蛋白基因序列,可知15个样品中只有2号和14号与蚜传密切相关的保守基序为DAG,其余均突变为DTG。 克隆了9号、13号和15号样品的HC-Pro的部分序列,与蚜传相关的基序没有发生突变。紧接着做了1号,2号,7号,9号,13号,14号,15号7个样品的蚜传实验,其中13号不能蚜传,1号、7号、9号、15号蚜传活性降低。结合前面的序列比对得出结论,DAG基序突变为DTG能使病毒的蚜传活性大大降低,甚至丧失。