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目的建立醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)诱导的人结肠癌SW480细胞凋亡模型,运用比较蛋白质组学分析鉴定细胞凋亡前后的差异表达蛋白质,从蛋白表达水平为进一步阐明MPA诱导结肠癌细胞发生凋亡的机理提供新的实验依据。方法1.采用醋酸甲羟孕酮诱导SW480细胞凋亡。通过MTT、流式细胞技术分析细胞抑制率,选择合适的药物浓度和诱导时间;透射电子显微镜观察用药前后亚细胞结构的改变、细胞周期和凋亡检测对凋亡结果进行验证,构建凋亡模型。2.采用双向电泳技术分离MPA处理组和对照组SW480细胞全蛋白,PDQUEST8.0软件分析二维凝胶电泳图谱,筛选出SW480细胞凋亡前后的差异蛋白点,胰酶酶解,HPLC-Chip/MS在线分析、鉴定差异表达蛋白点。3.使用Mascot软件在UniProtKB/SWISS-PORT数据库中搜索鉴定差异表达蛋白,生物信息学分析,得到差异蛋白的相关肽段的MS/MS质谱图。结果1.不同浓度的MPA对结肠癌SW480细胞的增殖有明显的抑制和诱导凋亡作用,半数抑制浓度约为50μmol/L。细胞周期分析表明MPA诱导结肠癌细胞凋亡的作用可能与细胞周期的阻滞相关,此阻滞作用具有剂量依赖性。50μmol/LMPA处理细胞48h后,透射电镜观察可见:细胞核固缩、碎裂,染色质高度浓缩,并出现趋边凝集,有大量凋亡小体形成。2.双向电泳技术分离凋亡前后的SW480细胞全蛋白,PDQUEST软件比对,筛选5个表达有差异的蛋白斑点,HPLC-Chip/MS分析鉴定,发现有2个蛋白在凋亡组表达上调,5个蛋白在凋亡组下凋。分别是Ubiquitin、LMO3、HSP10、Solute carrier family 22 member 11、UCHL 2、NDPK-A、Laminin receptor 1等7种SW480细胞凋亡相关蛋白。结论MPA可诱导人结肠癌SW480细胞发生凋亡,其作用可能与细胞周期的阻滞相关。所鉴定出的7种差异蛋白可能作为MPA抗结肠癌的潜在生物标志物,在凋亡途径中起着重要作用。