香茶藨子叶片中总酚酸、总黄酮提取及生物活性研究

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在本实验中采用低共熔溶剂作为提取溶剂,利用负压空化提取技术对不同时期香茶藨子叶片中总酚酸、总黄酮进行绿色高效提取,通过HPLC对香茶藨子叶片中没食子酸、绿原酸、芦丁、阿魏酸、异槲皮苷5种常见生物活性成分进行定性定量分析,结合体外抗氧化、抗肿瘤实验对其生物活性进行比较,结果如下:1.对香茶藨子叶片中总酚酸、总黄酮的提取工艺参数进行了BBD实验设计和工艺优化,确定了最优的负压空化辅助低共熔溶剂提取的参数:低共熔溶剂组分:乳酸/氯化胆碱(2:1,mol/mol);低共熔溶剂含水量:25%;低共熔溶剂与植物粉末液固比:26:1 mL/g;负压压力:-0.08 MPa;提取温度:50℃;提取时间:25 min;提取次数:2。在上述优化条件下进行了验证实验,香茶藨子叶片中总酚酸、总黄酮提取量的平均值分别为:95.78 mg/g和33.63 mg/g,提取含量高于超声辅助低共熔溶剂提取和70%乙醇结合负压空化提取的提取量。2.比较2014年5月~11月采集的7个时期点香茶蘸子叶片中总酚酸、总黄酮含量,结果表明7月16日采集的样品中总酚酸含量最高,8月14日采集的样品中总黄酮含量最高。建立了没食子酸、绿原酸、芦丁、阿魏酸、异槲皮苷5种常见生物活性成分的HPLC-UV分析检测方法:色谱条件:色谱柱:C18(5μm,250×4.6 mm i.d.);流动相:0.10%磷酸水溶液(A)-乙腈(B);流速1 mL/min:柱温为35℃;进样量:10μL;检测波长:273 nm和320 nm;梯度洗脱条件:0-6 min,9-18%(B);6.13 min,18-25%(B);13-23 min, 25.40%(B):23-25 min,40-60%(B).测得不同时期采集的香茶藨子叶片中没食子酸、异槲皮苷含量最大值出现在7月16日样品中分别为17.23 mg/mL和1.58 mg/mL;绿原酸、芦丁含量最大值出现在8月14日样品中分别为3.68 mg/mL和7.42 mg/mL;阿魏酸含量最大值出现在6月16目样品中为3.35 mg/mL.3.通过DPPH自由基清除能力测定、抑制羟基自由基(·OH)能力测定和抑制超氧阴离子自由基能力测定比较不同时期香茶藨子叶片粗提物的抗氧化活性,三组实验结果均显示8月14日采集的茶藨子叶片抗氧化能力最强。测定不同时期香茶藨子叶片粗提物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用结果表明,8月14日采集的香茶藨子叶片粗提物抗肿瘤活性最强,IC50=0.48 g/mL,并且对MCF-7细胞的抑制作用呈时间-剂量效应关系。结合上一章总酚酸、总黄酮含量的测定结果,初步判断香茶藨子叶片粗提物活性与其总黄酮含量的相关性高于与总酚酸的相关性。综上所述,负压空化辅助低共熔溶剂提取非常适用于香茶藨子叶片中总酚酸、总黄酮的提取,低共熔溶剂作为一种新型提取溶剂,具有稳定性好,可生物降解,低毒性,对不同极性化合物提取能力高等优点,可成为提取植物材料中活性成分的绿色溶剂。结合生物活性实验及HPLC-UV分析确定香茶藨子叶片的最佳利用期为8月份,对香茶藨子资源的合理利用具有参考价值。
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