【摘 要】
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本研究设计7对PCR套式引物,应用RT-PCR方法及RACE末端扩增法,分片段扩增了猪戊型肝炎病毒甘肃省分离株swCH189全基因组序列。swCH189基因组长为7284nt,GenBank登录号FJ610232
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本研究设计7对PCR套式引物,应用RT-PCR方法及RACE末端扩增法,分片段扩增了猪戊型肝炎病毒甘肃省分离株swCH189全基因组序列。swCH189基因组长为7284nt,GenBank登录号FJ610232,除3’端poly(A)尾外,基因组长为7171nt,共有3个ORFs,ORF1长5124bp,编码1708aa。ORF2长2025bp,编码674aa,ORF3长345bp,编码114aa。其基因组结构特征与HEV基因IV型一致。HEV swCH189株与其他毒株全基因组序列核苷酸同源性为73.7%～89.6%; ORF2核苷酸同源性为79.1%～91.8%.swCH189株ORF1与己报道的Ⅰ～Ⅲ型毒株的ORF 1氨基酸同源性为78.8%～86.9%,而与IV型毒株的同源性达93.7%～97.6%。swCH189株ORF2与已报道的I～III型毒株的氨基酸同源性为87.5%～92.4%,与IV型毒株的同源性为95.9～98.2%。swCH189株ORF3与已报道的I～III型毒株的氨基酸同源性为75.2%～84.0%,与IV型毒株的同源性为97.5%～99.2%。系统进化树分析显示,swCH189株属HEV基因IV型。成功构建了pET32a(+)-CP239表达质粒,并在大肠杆菌Rosseta中获得表达。表达蛋白编码序列对应于ORF2序列的第1142～1870nt ,表达的重组蛋白大小为45.3kDa并经western blot检测证实其具有抗体结合活性。
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