糖尿病脑病(Diabetic Encephalopathy,DE)是一种以认知功能障碍为主要表现的糖尿病并发症。该病属于神经科和内分泌科的交叉地带,且糖尿病认知功能障碍的形成是多因素、多环节共同作用的病理过程,发病机理比较复杂,研究相对滞后,而大部分病理机制针对性药物如醛糖还原酶抑制剂、非酶性糖基化抑制剂、谷胱甘肽制剂、神经营养因子等研究因各种原因仍停留在临床前或临床研究阶段,因此,根据发病机制开发新型治疗药物对DE治疗意义重大。DE属中医消渴病合并呆病、健忘的范畴,消渴的基本病机为阴虚燥热,病变的脏腑着重在肺、胃、肾,而以肾为关键,滋补肾阴是消渴病的基本治则。六味地黄汤作为补肾养阴的代表方,被中医作为治疗消渴病的基础方受到广泛应用。药理研究表明,该方一方面能增加肝糖原含量,减低肝葡萄糖-6-磷酸酶活性,降低糖尿病动物的血糖、血脂、游离脂肪酸,具有抗氧化、清除自由基等作用;另一方面,该方能明显提高记忆力、增加反应速度,改善认知能力,对进行性和退行性健忘症具有显著预防效果,能明显改善老年痴呆症患者的智力、生活能力、记忆能力。因此,本论文围绕DE的发病机制,从改善认知、抗氧化、抗凋亡、胆碱神经功能调节及神经营养因子表达等方面,对六味地黄汤改善DE认知障碍及神经病理改变的作用及机制进行了深入的研究,为该方防治DE提供科学依据。第一章,LWDHD改善认知障碍的有效部位和成分筛选。我们首先采用过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxi-some proliferator activated receptorδ,PPARδ)激动剂筛选模型,蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP-1B)抑制剂筛选模型,T、B淋巴细胞增殖模型,小鼠亚急性衰老模型及阴虚模型,对六味地黄汤4个提取部位(总提取物、水洗脱部位、30%醇洗脱部位、70%醇洗脱部位)和9个相关单体成分(芍药苷、没食子酸、丹皮酚、梓醇、马钱苷、莫诺苷、桃叶珊瑚苷、23-乙酰泽泻内酯醇B、薯蓣皂苷元)进行了活性评估。结果显示:1.丹皮酚、薯蓣皂苷元、桃叶珊瑚苷具有显著增加PPARδ含量的作用。2.丹皮酚、莫诺苷、马钱苷、23-乙酰泽泻内酯醇B、芍药苷、桃叶珊瑚苷均有一定程度抑制PTP-1B的作用。3.丹皮酚、薯蓣皂苷元对B细胞有一定增殖作用,芍药苷、桃叶珊瑚苷对t淋巴细胞增殖作用较明显,而莫诺苷对t、b淋巴细胞均有增殖作用,提取部位中水洗脱部位和总提取物对t、b淋巴细胞有一定增殖作用。4.六味地黄醇提水洗脱部位可以改善d-半乳糖所致小鼠亚急性衰老模型的学习记忆能力,清除自由基,减轻氧化应激,降低脑内aβ含量,具有较明显抗衰老作用。5.六味地黄醇提水洗脱部位可提高甲状腺素和利血平所致小鼠阴虚模型的体重及胸腺、脾脏指数,减轻氧化应激,降低camp/cgmp和t3、t4水平。由此可见,六味地黄醇提水洗脱部位为该方改善认知缺陷的有效部位;其主要活性成分丹皮酚对多种指标均有效,为其主要有效成分。第二章,lwdhd水洗脱部位改善de认知障碍和神经病理改变的作用研究。本部分采用高脂高糖饲料加小剂量注射stz法制备de大鼠模型,给予六味地黄醇提水洗脱部位(2.33g/kg和9.32g/kg)治疗一个月后,进行行为学测试及血糖水平、氧化指标检测、神经细胞凋亡、chat、ache的测定及bdnf、igf-1等神经营养因子表达方面的研究。结果显示:在水迷宫实验中,六味地黄醇提水洗脱部位可明显缩短de大鼠的逃避潜伏期和探索距离,延长目标象限游泳时间,增加站台穿越次数;血清及海马组织匀浆各指标检测显示,六味地黄醇提水洗脱部位可显著降低de大鼠血糖;升高海马组织cat、na~+-k~+-atp酶活力及gsh水平升高,降低lpo水平和inos活力;升高海马组织chat活力而降低ache活力。tunel染色及caspase-3、bdnf、igf-1免疫组化染色结果显示,六味地黄醇提水洗脱部位可抑制de大鼠海马dg区及皮质神经元凋亡,可增强de大鼠海马dg区及皮质神经元神经营养因子bdnf和igf的表达;刚果红染色显示,六味地黄醇提水洗脱部位可减少de大鼠海马dg区及皮质神经元aβ沉积。第三章,丹皮酚改善de认知障碍和神经病理改变的作用与机制研究。众多研究表明丹皮酚对神经损伤具有保护作用,目前已被用作减弱神经毒性的神经保护剂。本研究第一章内容显示丹皮酚具有激动pparδ受体和抑制ptp-1b的活性,为六味地黄汤主要活性成分,具有潜在防治de活性。故此本部分内容对丹皮酚防治de的作用及机制进行了研究。结果显示:在水迷宫实验中,丹皮酚(50mg/kg和100mg/kg)可明显缩短de大鼠的逃避潜伏期和探索距离,延长目标象限游泳时间,增加站台穿越次数;血清及海马组织匀浆各指标检测显示,丹皮酚可显著降低de大鼠血糖及血清中的ages和gsp含量;升高海马组织cat、na~+-k~+-atp酶活力及gsh水平升高,降低lpo水平和inos活力;升高海马组织chat活力而降低ache活力。tunel染色及caspase-3、BDNF、IGF-1免疫组化染色结果显示,丹皮酚可抑制DE大鼠海马DG区及皮质神经元凋亡,可增强DE大鼠海马DG区及皮质神经元神经营养因子BDNF和IGF的表达,减少RAGE,核因子NF-κB表达;刚果红染色显示,丹皮酚可减少DE大鼠海马DG区及皮质神经元Aβ沉积。综上所述,六味地黄醇提水洗脱部位和主要活性成分丹皮酚均可通过降血糖,抗氧化,抗凋亡,调节胆碱能神经功能,增强神经营养因子表达,减少Aβ沉积等机制改善糖尿病脑病模型大鼠认知障碍及海马组织病变,具有神经保护作用;初步的研究结果表明,干预AGEs/RAGE/NF-κB通路可能是丹皮酚防治糖尿病脑病的机制。