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目的： 本文采用免疫组织化学方法检测TTF-1和GLI1在肺癌中表达，探讨其表达在诊断原发性肺癌中的价值及临床病理学意义。 材料和方法： 1.材料 收集2008年1月至2010年12月中国医大一院及我院具有完整临床资料的原发性肺癌手术切除标本56例，术后病理诊断均为腺癌。TTF-1和Gli1羊抗兔多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。SP法免疫组织化学试剂盒、DAB显色液购自福州迈新公司。 2.方法 采用免疫组织化学SP法:所有组织标本均经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，以二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化。3％过氧化氢室温15min去除内源性过氧化酶。pH7.4的PBS清洗后，置于pH6.0的柠檬酸缓冲液121℃高压热抗原修复2min，自然冷却后，PBS清洗。滴加山羊血清，室温封闭20min。滴加一抗（TTF-11∶200;Gli11∶100），4℃孵育过夜。次日室温放置30min后，PBS清洗，滴加兔二抗，37℃10min。PBS清洗，滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，37℃10min。DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化后常规脱水、透明，封片后于光学显微镜下观察结果。 3.阳性结果判定 免疫组织化学染色，阳性表达为棕黄色。TTF-1细胞核表达，GLI1细胞浆及细胞核表达。每张切片400倍显微镜下随机选取5个视野，根据计算5个视野阳性细胞数平均百分数(％)及染色强度（+/-）。染色强度阳性为2分，阴性为0分。由两位病理学专家独立判定，结果取二者平均值。综合评分指数M=染色强度分A*阳性细胞数百分数B;M＜0.5为（-）;0.5《M＜1为(+);1《M＜1.5为(++);M》1.5为(+++)。 4.统计学处理 采用SPSS13.0统计软件，TTF-1和GLI1蛋白表达水平与患者临床病理学参数的关系及相关性研究均采用卡方检验，P＜0.05为有统计学意义。 结果： 1.TTF-1和GLI1在肺癌组织中表达 TTF-1在肺癌中呈胞核表达（图1AB），56例肺癌组织中有44例呈高表达。Gli1蛋白在肺腺癌组织中呈胞核和胞浆表达（图1CD），56例肺癌组织中有36例呈高表达（表1）。 2.TTF-1和GLI1蛋白表达与肺癌患者临床病理学参数的关系 通过卡方检验，TTF-1和Gli1蛋白表达均与肺癌患者淋巴结相关（P＜0.05)，但与年龄、性别及分化程度无明显相关性（表1）。 表1:TTF-1和Gli1表达与肺癌患者临床病理学参数关系 参数TTF-1表达Gli1表达┏━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃参数TTF-1表达Gli1表达┃┣━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃低(％)┃高(％）X2┃P┃低(％)┃高(％）X2P┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃12/56(21.4％)┃44/56(78.6％)┃┃20/56(35.7％)┃36/56(64.3％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃≥608/56(14.3％)┃26/56(46.4％)0.22┃0.634┃14/56(25％)┃1.12┃┃┃┃┃┃20/56(35.7％)0.289┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃年龄┃┃┃┃┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃＜604/56(7.1％)┃18/56(32.1％)┃┃6/56(10.7％)┃16/56(28.6％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃男7/56(12.5％)┃0.13┃┃┃0.02┃┃┃23/56(41.1％)┃0.709┃11/56(19.6％)┃19/56(33.9％)0.873┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃性别┃┃┃┃┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃女5/56(8.9％)┃21/56(37.5％)┃┃9/56(16.1％)┃17/56(30.3％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃高分3/56(5.4％)┃0.54┃┃┃1.10┃┃┃16/56(28.6％)┃0.461┃5/56(8.9％)┃14/56(25％)0.293┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃分化中低┃┃┃┃┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃9/56(16.1％)┃28/56(50％)┃┃15/56(26.8％)┃22/56(39.3％)┃┣━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃N04/56(7.1％)┃34/56(60.7％)8.34┃0.004┃17/56(30.4％)┃4.19┃┃淋巴结┃6┃┃┃21/56(37.53％)20.041┃┃转移N18/56(14.3％)┃10/56(17.9％)┃┃3/56(5.4％)┃15/56(26.8％)┃┗━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━┻━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛ 3.TTF-1和GLI1蛋白表达相关性 TTF-1和Gli1在肺癌中表达无明显相关性（x2=1.358，P=0.244）。 讨论： 目前通过免疫组化研究发现，TTF-1在大多数肺小细胞癌、原发性和转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤呈阳性表达。本研究发现，TTF-1在原发性肺腺癌广泛表达，此结果与文献报道基本一致。由此看来，TTF-1可用于肺原发腺癌的诊断。此外，TTF-1在有肿瘤淋巴结转移病例中，当原发病灶隐匿，而出现淋巴结内腺癌转移时，TTF-1也有助于判断淋巴结内腺癌的组织来源。 Gli1与Hedgehog信号通路中下游基因的特定序列结合，是整个Hh信号通路中最关键的信号分子，其表达上调会引起目的基因的转录激活，通过调控Hedgehog信号通路目的基因的转录调节肿瘤细胞增殖、分化、转移的多种分子基因转录水平，最终影响肿瘤的发生发展。在人基底细胞癌及髓母细胞瘤中存在Gli1的过度表达，通过Gli1siRNA干扰可明显抑制肿瘤细胞的增殖，诱导其凋亡。本实验研究发现Gli1在肺腺癌中广泛表达，并与肺癌患者淋巴结转移相关。国内研究同样发现，Gli1在乳腺癌、肝癌、胃癌及大肠癌中表达明显高于癌旁组织，并与患者淋巴结转移相关。提示Gli1在肿瘤发生及转移中可能起着重要作用。 TTF-1和Gli1在肺腺癌中表达上调，并与患者淋巴结转移相关，但两者之间并没有明显相关性。至今还没有TTF-1和Gli1在肺癌中表达相关性研究，笔者认为TTF-1和Gli1可能独立影响肺癌的发生发展。后期我们将通过加大样本量进一步明确TTF-1和Gli1在肺癌中表达的关系。 综上所述，TTF-1和Gli1在肺癌中表达上调，TTF-1和Gli1均与肺癌患者淋巴结转移相关。两者在肺癌中表达无有明显相关性。TTF-1在肺腺癌中有较高的特异性及敏感性，具有诊断原发性肺腺癌的价值。同时，Gli1在肺癌的发生发展中充当一个癌基因角色。但他与肿瘤生物学行为的关系以及是否能真正应用于肺癌的早期诊断和指导治疗还有待于进一步深入研究。