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Cytoskeleton-Associated Protein5(CKAP5)属XMAP215(XenopusMicrotubule-Associated Protein215)家族成员,该家族成员均为有丝分裂过程中调控微管动力的微管结合蛋白(Microtubule-Associated Proteins,MAPs)。在小鼠卵母细胞减数分裂中有关CKAP5的功能及其发挥作用的分子机制尚不明确。本研究首先通过收集不同时期小鼠卵母细胞(GV,GVBD,MI,AI-TI,MⅡ,AⅡ-TⅡ)和早期胚胎(PN,late1-cell,2-cell),运用荧光实时定量PCR、免疫印迹及免疫荧光染色等技术检测了CKAP5的表达及亚细胞定位。结果显示CKAP5 mRNA和蛋白在各个时期均有表达,并且mRNA转录和蛋白表达水平的趋势大致相同。CKAP5在GV和GVBD时期表达量较低,MI时期开始增加,在随后的AI-TI,MⅡ,AⅡ-TⅡ和PN时期处于较高表达水平。在late1-cell和2-cell时期,CKAP5含量有所下降。免疫荧光染色实验表明CKAP5的亚细胞定位存在细胞周期依赖性的特点,即随着有丝分裂器的组装而组装,随有丝分裂器的解聚而解聚。应用特异性Morpholino敲减CKAP5的表达,不仅会影响第一极体(the first polar body,PB1)的排放,还会引起纺锤体组装和染色体排列异常。此外,对CKAP5敲减后,胚胎发育率也明显降低。为了检测CKAP5和微管之间的关系,我们通过分别添加促微管解聚的Nocodazole和促微管聚集的药物Taxol进而改变微管的稳态平衡,结果发现这两种药物并未改变CKAP5蛋白表达量,但会影响蛋白的分布。我们进一步使用免疫共沉淀的方法检测到CKAP5与CLTC(Clathrin Heavy Chain1)发生共沉淀,表明这两个蛋白有相互作用,随后的敲减实验也显示两种蛋白中任何一方的缺失都能影响另一种蛋白的定位。 总之,在小鼠卵母细胞减数分裂成熟和早期胚胎发育中,CKAP5在纺锤体组装和染色体排列等过程中发挥了重要的作用。