酒花多酚的提取纯化及其降脂、抗氧化作用研究

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植物多酚是植物体内的次级代谢产物,部分多酚类化合物兼有抗氧化和降血脂作用,越来越多的研究证实多酚类物质具有多种生物学活性,对人类的健康具有积极作用。啤酒花用于啤酒酿造中的主要有效成分是酒花树脂及酒花油。超临界CO2可以实现对这些成分的有效萃取,制备的啤酒花浸膏因质量稳定,易于储存和利用率高等特点在啤酒酿造中的使用量正在逐年增加,但是酒花中含量丰富的多酚类物质由于具有一定的极性,不能被超临界CO2萃取出来。酒花中的多酚类物质被保留在超临界CO2萃取后的萃余物中,而其萃余物基本上作为废弃物,未得到有效利用。因此,本文对超临界CO2萃取酒花后的萃余物中的多酚类物质进行了研究。以超临界CO2酒花萃余物为研究对象,对废酒花中的酒花多酚进行了提取和纯化,并对酒花多酚抗氧化和降血脂生物功效进行系统的研究,为降血脂和预防动脉粥样硬化提供新药来源,可为废酒花的再利用提供理论基础。主要研究内容及结果如下(1)超临界CO2萃取制备废酒花的工艺条件:CO2流量25 L/h,萃取压力25 MPa,萃取温度50℃,分离柱压为10 MPa,分离温度60℃,萃取时间1.5 h。此条件下,酒花中94%的多酚残留在酒花萃余物中,只有4%的多酚在酒花浸膏中(2)本实验中对超声波、热回流和恒温水浴振荡三种提取方式进行了对比,提取量大小关系为:超声波>热回流>恒温振荡,所以最终采用超声波辅助提取,其工艺条件为;料液比1:20,温度60℃,提取溶剂为50%乙醇,提取时间30 min,提取两次。此条件下,酒花多酚的提取量达到43.4 mg/g废酒花。(3)采用静态吸附与解吸试验对3种树脂(SP850、HP20、HP2GML)纯化多酚粗提液进行筛选。结果筛选出SP850树脂(吸附率和解析率分别为87.4%和78.4%)为最佳分离纯化酒花多酚的树脂。SP850树脂纯化酒花多酚的工艺条件为:上样多酚粗提液浓度为7.3 mg/mL,上样体积6 BV,吸附速率为3 BV/h,采用60%的乙醇洗脱,洗脱速率为2 BV/h,洗脱体积4 BV,水洗速率2BV/h,水洗体积为选择5 BV。此条件下制备的酒花多酚纯化物多酚含量可达75.1%。(4)测定了酒花多酚纯化物中总酚含量达75.1%,原花青素含量55.18%,鉴定出10种酚类成分,其中主要成分为芦丁和金丝桃苷,其含量分别为82.10 mg/g和78.10 mg/g,分别占总酚含量的10.89%和10.36%,其次表儿茶素、紫云英苷含量也比较高,占总酚含量分别为4.96%和3.51%,其余含量较低。(5)通过高脂血症模型小鼠体内试验得出,啤酒多酚可以降低高脂血症小鼠血清中TC、TG和LDL-C含量,升高HDL-C含量,还可以降低肝脏中TC和TG的含量,说明其具有降血脂和肝脂的功效。酒花多酚还可以提高小鼠血细胞SOD活力、全血GSH-Px活力、血清CAT活力和降低血清中MDA含量,以及提高肝脏中GSH-Px、SOD、CAT活力,降低MDA含量,说明其也具有体内抗氧化生物活性,可以作为预防AS的新药来源。
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