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低温是经常发生且危害严重的逆境因素之一，许多果树在经受低温胁迫后都发生不同程度的伤害，严重时甚至导致整个植株死亡。近年来在模式植物拟南芥中发现的CBF(CRT/DRE binding factor)，低温反应途径，使当前果树抗寒分子生物学与基因工程研究取得了重大突破。CBF转录激活因子可与COR(cold-regulated)基因启动子区域的CRT/DRE(C-repeat/dehydration responsive element)调控元件特异结合，并作为COR蛋白表达的开关，诱导一系列COR蛋白的表达，从而提高植物的抗冻力。本文对山葡萄低温诱导基因CBF1进行了克隆与序列分析；构建了山葡萄转录因子CBF1基因的植物表达载体，并建立了山葡萄再生体系，研究了山葡萄转录因子CBF1基因在烟草和山葡萄中的表达情况。主要研究结果如下： 1．通过将GenBank上发表的几种植物的CBF1同源基因进行比较在其保守区域设计一对兼并引物，采用RT-PCR方法对山葡萄低温诱导转录因子CBF1基因中间片段进行克隆，得到一大小为758bp的片段，并在此中间片段区域设计了两对特异引物，采用反向PCR方法对山葡萄转录因子CBF1基因的5′和3′端的非编码区进行克隆，结果得到一长度为752bp的片段，与中间片段合并得到一大小为910bp的片段，此为预测的全长。在预测的全长区域的非编码区和编码区内分别设计两对特异引物对山葡萄基因组和cDNA进行扩增，测序结果得到的两序列在编码区内完全一致，这也说明了山葡萄转录因子CBF1基因在编码区没有内含子出现。应用DNAman软件将山葡萄转录因子CBF1基因全长与Genebank上发表的几种植物CBF1基因进行核苷酸和氨基酸同源性比较，结果发现山葡萄转录因子CBF1和葡萄(Vitis vinifera)CBF1基因的氨基酸同源性为98.1％；核苷酸的同源性为97.6％，这说明我们已经成功地克隆了山葡萄(Vitis Amurensis)转录因子CBF1基因，在GenBank上的登记号为DQ517296。 2．利用35s启动子构建了山葡萄转录因子CBF1基因的植物表达载体。应用Xba Ⅰ和Sac Ⅰ将质粒pBI121中的GUS基因切除，设计一对含有Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点的特异引物PZ1、PZ2，对山葡萄cDNA进行扩增，将PCR产物酶切后插入到质粒pBI121中的GUS基因切除部位，获得山葡萄转录因子CBF1基因的植物表达载体pBC35S，进一步采用农杆菌介导法转化烟草和山葡萄，对转基因烟草进行PCR检测，结果表明山葡萄转录因子CBF1基因转化烟草的成功率很高，达到了94％，但对山葡萄进行转化却未得到转基因植株，这个问题还有待进一步研究。